二氧化鈦具有富集磷酸絲氨酸（pSer）、磷酸蘇氨酸（pThr）和磷酸酪氨酸（pTyr）殘基的選擇性親和力。TiO2-功能性磁珠（PuriMag Si-TiO2）是一種專有的磁性材料微粒載體

廈門普睿邁格生物科技有限公司是一家專注于發展納米材料及生物醫藥技術的高科技創新型公司，旨在生命科學、生物醫藥、生物檢測領域開發新的納米材料及其應用技術和產品，并為相關領域提供技術服務與支持。 公司研發和生產基地位于福建省廈門市集美杏林灣，緊臨中科院城市環境研究所和華僑大學。福建省廈門市產業技術創新大廈，所處地理位置優越，交通便利，環境優雅。普睿邁格生技以國際領先的生物納米表面技術和高效生物試劑技術為核心，專注于開發高端細胞培養、特異性標記與捕獲，蛋白快速分離與純化，核酸提取與文庫構建，及高通量、自動化生物樣本處理綜合技術平臺，目前已經發展成為一家集自主研發、規模化生產和銷售服務于一體的生物醫學工程領域高科技企業。 普睿邁格生技秉承“創新以科技研發為本”的核心價值觀，致力于打造我國磁性顆粒在生物分離純化領域的領導品牌。公司擁有較強的科研力量和完善的管理體系，公司擁有多項自主開發的專利技術，產品包括磁性納米顆粒、介孔納米材料、磁性微球等，為醫學影像診斷的磁共振造影、細胞及生物分子的標記以及蛋白和細胞分離純化、生物分子和藥物裝載等領域提供新型、高效的產品和解決方案。公司下設有科技研發中心、應用工程中心、產品制造中心、市場銷售中心等四個主要機構。 公司擁有良好的經營環境和高素質的專業人才，有研究員2人、教授4人、高級會計師2人、博士后2人、高級工程師4人、工程師9人、助理工程師15人、研究生25人。大專以上學歷的職工占總體的98％以上。

1. 概述

蛋白磷酸化參與多種細胞過程，約30%蛋白可實現磷酸化修飾。很多研究聚焦于蛋白的翻譯后修飾。然而，因磷酸化肽豐度低、化學計量低和理化特性特殊等因素，導致長期以來蛋白質組尺度上的磷酸化研究都是蛋白質組學研究的一個重要挑戰。因此，當前迫切需要能特異富集磷酸化肽、且與質譜分析兼容的富集技術。

二氧化鈦具有富集磷酸絲氨酸（pSer）、磷酸蘇氨酸（pThr）和磷酸酪氨酸（pTyr）殘基的選擇性親和力。TiO₂-功能性磁珠（PuriMag Si-TiO₂）是一種專有的磁性材料微粒載體，能在復雜生物樣品的蛋白消化物中簡單、方便、、高特異、高重復性富集磷酸化肽。磁珠表面的二氧化鈦納米粒子對于單磷酸化肽和多磷酸化肽沒有明顯的偏好，因而非常適合單步富集磷酸化肽用于基于質譜的蛋白質組學分析。PuriMag Si-TiO₂以其出色的特異性，超越競爭對手的產品，具有較高的磷酸化肽回收率。PuriMag Si-TiO₂技術的如下：

l  對磷酸化肽高特異性；

l  對單磷酸化肽和多磷酸化肽無明顯的偏好；

l  小于10s的快速磁響應性，減少樣品損失，更適合自動化操作；

l  抗氧化特性，降低樣品被污染風險。

2. 產品信息

3. 結合和洗脫程序

上樣緩沖液（Loading buffer）: 1 M glycolic acid in 80% acetonitrile (ACN) and 5% trifluoroacetic acid (TFA) ；

洗滌緩沖液（Wash buffer）: 80% ACN, 1% TFA ；

洗脫緩沖液（Elution buffer）: 1% NH₄OH；

影響磷酸肽結合的因素包括：緩沖液的組成、pH值以及是否存在污染物/干擾化合物。磁珠使用量應根據應用進行優化，建議使用過量的含磷酸肽樣品使磁珠飽和。

注意：為確保性能，所有的試劑應為分析級新鮮配制。后續的操作流程所使用的緩沖液僅作為示例，并非限制。PuriMagSi-TiO₂磁珠在磷酸肽富集過程中與一系列不同的緩沖液兼容。為達到的純度和產量，應優化的具體富集過程的實驗條件。

3.1 PuriMag Si-TiO₂磁珠的平衡

PuriMag Si-TiO₂磁珠以25 mg/ml濃度，保存于20% 乙醇中。使用前應對磁珠進行洗滌和平衡，可根據實際需要放大和縮小磁珠用量。zui小體積為10微升的微粒懸浮液是確保磁珠能與緩沖液分離。以下方案是從約500μg的總蛋白質消化液中純化磷酸肽。

1）渦旋混合PuriMag Si-TiO₂磁珠以確保均勻分散。

2）轉移40μl（1mg）PuriMag Si-TiO₂磁珠到2ml離心管。

3）將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

4）用200μl的70％乙醇溫和洗滌微粒（例如間或渦旋混合）5分鐘。

5）將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

6）重復步驟4和5。

7）用100μl的1％NH₄OH輕輕洗滌微粒（例如間或渦旋混合）10分鐘。

8）將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

9）50μl上樣緩沖液平衡磁珠60秒。

10）將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

11）重復第9步和第10步兩次，共三次平衡。

13）除去上樣緩沖液后，PuriMag Si-TiO₂磁珠可用于結合目標磷酸肽。

3.2 磷酸肽富集過程

1) 用上樣緩沖液調整消化后蛋白至合適濃度（包含~ 500μg總蛋白）與平衡好的PuriMag Si-TiO₂磁珠相匹配。

注意：若磷酸肽為固體，請用不低于100μl的上樣緩沖液溶解。

2) 渦旋或移液器吸打混勻磁珠。

3) 室溫孵育20分鐘，過程中確保樣品和磁珠的混合懸浮。

4) 將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

5) 100μl的上樣緩沖液溫和洗滌30秒，去除未結合的樣品。

6) 將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

7) 100 μl洗滌緩沖溫和洗滌2分鐘，去除非特異性結合的多肽。

8) 將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移棄上清。

9) 重復第7步和第8步2次，共洗滌3次。

10) 使用溶液（10% ACN和0.2% TFA）額外洗滌兩次。

11) 80μl洗脫緩沖液洗脫15分鐘，確保洗脫過程中磁珠的懸浮和混合。

12) 重復第11步，再用80μl洗脫緩沖液洗脫兩次。共獲得240μl洗脫樣品。為獲得濃縮樣品，可用3×40μl洗脫緩沖液用于洗脫過程。

13) 將離心管放在磁分離器上，放置30秒，移取上清到一新離心管。

14) 增在240μl洗脫液中加入60μl 10%甲酸（FA）酸化樣本。

15) 用質譜分析樣品。質譜分析前，可對樣本脫鹽（如C18），濃縮（如真空離心或凍干）。

4. 問題解決方法

本頁產品地址：http://www.lgsztm.com/sell/show-7894388.html