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價格:電議
所在地:福建 廈門市
型號:PuriMag
更新時間:2024-09-10
瀏覽次數(shù):1045
公司地址:廈門集美杏林營運中心2樓
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許慧(先生)
【產(chǎn)品介紹】
磁珠法細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司新研制的一種細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒。本產(chǎn)品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解細(xì)菌細(xì)胞,釋放出基因組DNA,在結(jié)合液的作用下磁珠選擇性的吸附裂解液中的基因組DNA。通過洗滌液的清洗完全除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads釋放吸附的基因組DNA,即獲得高質(zhì)量的基因組DNA。從1ml的菌液中可以獲得10~20 μg DNA,OD260/OD280比值一般為1.7~1.9,抽提的DNA可直接用于下游實驗。適用于手工細(xì)菌基因組DNA的提取,可配合各類磁棒式核酸提取儀或自動化/半自動化工作站。
【特點】
l 耗時少:細(xì)菌DNA提取周期在50分鐘左右;
l 操作簡便:提取過程無需離心;
l 無害:試劑中不含有有毒物質(zhì);
l 效果穩(wěn)定:OD260/OD280穩(wěn)定在1.7-2.0之間,獲得細(xì)菌基因組DNA的純度更高;
l 自動化:可以同時處理多個樣品,實現(xiàn)細(xì)菌基因組提取的高通量化和自動化。
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存,其余試劑室溫保存,有效期詳見包裝。
l 嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團(tuán),從而使磁珠表面積減小,降低樣品回收得率,使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠(通常需渦旋振蕩20秒)。
【試劑盒組成】
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組分 |
100次 |
保存 |
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Lysis buffer |
20 ml |
常溫 |
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Binding buffer |
18ml |
常溫 |
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Wash buffer |
75%乙醇(用戶自備) |
常溫 |
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Elution buffer |
10 ml |
常溫 |
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PuriMag bead |
2 ml |
2-8℃ |
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RNase A |
2 ml |
2-8℃ |
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蛋白酶K |
1 ml |
2-8℃ |
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溶菌酶 |
2 ml(選配試劑) |
2-8℃ |
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異丙醇 |
用戶自備 |
常溫 |
DNA濃度及純度檢測 :(1)得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關(guān),所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 (2)DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260=1相當(dāng)于大約50ng/ul雙鏈DNA,40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9,如果洗脫時使用去離子水,比值會偏低,因為pH和離子會影響吸光度,并不表示純度低。
【操作步驟】
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分菌→ |
1) 牙簽挑取平板菌落(1 mm)或取過夜培養(yǎng)細(xì)菌1 ml(細(xì)胞數(shù)為108-109)加入1.5 ml離心管。9000 rpm離心1 min,棄上清。(可選步驟:對于革蘭氏陽性菌,加入200 ul溶菌酶溶液重懸菌體,37 ℃水浴30~60 min。對細(xì)胞壁較厚的革蘭氏陽性菌,如金黃色葡萄球菌,可補(bǔ)加溶葡球菌酶助破壁。離心后備用。)
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裂解→ |
2) 加入200 ul Lysis buffer搖勻,漩渦振蕩混勻,室溫溫育10分鐘至溶液變粘稠;加入10 ul蛋白酶K,漩渦振蕩器混勻,56 ℃消化30 min。(可選步驟:若革蘭氏陽性菌溶液渾濁未消化完全,可12000 rpm離心2min后取上清使用。)
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除RNA→ |
3) 加入20 ul的 RNase A, 漩渦振蕩混勻,室溫溫育10分鐘以除去RNA。
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除蛋白→ |
4) 向離心管中加入180 ul Binding buffer,漩渦振蕩1-2 s。 |
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結(jié)合→ |
5) 取400 ul試樣加入磁珠懸液中(20 ul的 PuriMag bead和280 ul的異丙醇在一個新離心管中先預(yù)混),靜置5分鐘后,于磁力架上磁分離20 s,去上清。
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洗滌→ |
6) 向離心管加入700 ul Wash buffer,移液槍緩慢吹打混勻,磁力架上靜置20 s,小心吸棄上清(重復(fù)該步驟2次)。倒置離心管2-3 min,室溫晾干5 min,讓殘留乙醇揮發(fā)干凈,以免影響后續(xù)實驗。
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洗脫→ |
7) 向離心管加入50~100 ul Elution buffer,緩慢吹打混勻1~2 min。(Elution buffer在65~70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好,減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度)離心管磁力架上靜置0.5 min,小心吸走上清放入新離心管即為提取的DNA,存放于2-8 ℃,長期存放需置于-20 ℃。
提示:本試劑盒僅限科研用途。 |
免責(zé)聲明:以上所展示的[PuriMag 磁珠法細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒]信息由會員[普睿邁格生物科技有限公司]自行提供,內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由發(fā)布會員負(fù)責(zé)。