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價格:電議
所在地:福建 廈門市
型號:PuriMag
更新時間:2024-09-10
瀏覽次數:1097
公司地址:廈門集美杏林營運中心2樓
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許慧(先生)
【產品介紹】
瓊脂糖凝膠電泳是一種用于分離純化DNA片段的重要分子生物學實驗技術。磁珠法DNA膠回收試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司新研制的一種DNA膠回收試劑盒。本試劑盒中的試劑盒采用了獨特的緩沖液溶解由TAE或TBE電泳緩沖液制備的瓊脂糖凝膠塊,從凝膠塊中溶解的DNA片段可以特異性地吸附到硅基化磁珠的表面,在磁場的作用下,攜帶DNA的磁珠向磁鐵方法進行定向移動和聚集,與剩余的其它雜質完全分開。通過簡單的兩次洗滌,可以將雜質完全洗盡。后用水或低鹽緩沖液將結合在磁珠上的DNA洗脫下來,洗脫下來的 DNA片段純度高,完整性好,可直接用于連接反應、PCR 擴增、DNA測序等各種分子生物學實驗。本試劑盒可以采用手工操作進行,也可以經對自動化提取設備進行參數調試后,用于自動化或半自動化的工作平臺。
【特點】
l 磁珠之間吸附量差異小,可重復性好。
l 可選擇手動或自動操作方式。
l 操作簡單,無需離心或過濾等耗時操作。
l 可實現高通量
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads置于2-8℃保存,其余試劑室溫保存,有效期詳見包裝。
l 嚴禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團,從而使磁珠表面積減小,降低樣品回收得率,使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠(通常需渦旋振蕩20秒)。
【試劑盒組成】
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組分 |
100次 |
保存 |
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MG Buffer |
30 ml |
常溫 |
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Wash buffer |
75%乙醇(用戶自備) |
常溫 |
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Elution buffer |
5 ml |
常溫 |
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PuriMag bead |
2 ml |
2-8℃ |
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異丙醇 |
用戶自備 |
常溫 |
DNA濃度及純度檢測 :(1)得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關,所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 (2)DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260=1相當于大約50ng/ul雙鏈DNA,40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7~1.9,如果洗脫時使用去離子水,比值會偏低,因為pH和離子會影響吸光度,并不表示純度低。
【操作步驟】
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切膠→ |
1) 長波紫外燈照射下快速從瓊脂糖凝膠中切下目的條帶(盡量去除多余瓊脂糖膠),稱重后,將其放入干凈的1.5 ml離心管中。
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溶膠→ |
2) 向膠塊中加入1:1體積的MG buffer(體積:重量)(比如,100 mg的凝膠中加入100 μl的MG buffer。注:對于濃度大于2%的瓊脂糖凝膠,向膠塊中加入2:1體積的MG buffer)。將凝膠混合物在65 ℃條件下放置10 min,間或混勻直至膠塊完全溶解。
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結合→ |
3) 向離心管中加入20 μl PuriMag beads(磁珠搖勻后加入),移液槍吹打混勻后室溫靜置3 min,再吹打混勻1次,靜置3 min。磁分離20 s,吸棄上清。
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清洗→ |
4) 向離心管中再加入步驟2同樣體積的MG buffer,移液槍吹打混勻后室溫靜置3 min,于磁力架上磁分離20 s,吸棄上清。
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清洗→ |
5) 向離心管中加入700 ul Wash buffer,移液槍吹打混勻后室溫靜置2 min左右,置于磁力架上磁分離20 s,吸棄上清。重復該步驟一次。倒置離心管2-3 min,室溫晾干5 min,讓殘留乙醇揮發干凈,以免影響后續實驗。
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洗脫→ |
6) 向離心管中加入10-50 ul Elution buffer(Elution buffer在65-70 ℃中預熱后洗脫效果更好,減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度),移液槍吹打混勻1-2 min,于磁力架上磁分離20 s,小心吸走上清液放入新離心管中,即為提取的質粒DNA,可存放于2-8 ℃,長期存放需放置于-20 ℃。 |
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