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免疫印跡代做免疫印跡Western Blot實驗，代做WB實驗

上海維景生物科技有限公司

會員指數(shù)：

企業(yè)認(rèn)證：

價格：電議

所在地：上海

型號：免疫印跡

更新時間：2016-06-30

瀏覽次數(shù)：2916

公司地址：上海中山北路3856弄2號中環(huán)大廈1114室

13817407320 朱經(jīng)理(先生) 經(jīng)理

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產(chǎn)品簡介

免疫印跡常用于鑒定細(xì)胞或是組織樣本中某種特定蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

公司簡介

上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)，借助中科院細(xì)胞與免疫學(xué)實驗平臺，擁有強大的資金背景支持和專業(yè)的團(tuán)隊等資源。

上海維景生物是一家面向全國以專業(yè)從事免疫學(xué)實驗服務(wù)外包和免疫學(xué)試劑代理銷售為主的高新技術(shù)企業(yè)。公司的服務(wù)對象主要為醫(yī)藥科研人員、大型制藥公司等。

公司專注開展以下五種免疫學(xué)實驗服務(wù)：免疫印跡（Western Blotting）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP) 。絕對保證實驗質(zhì)量，客戶滿意后才收取尾款。

同時公司還是美國CMCTAG品牌的全國獨家總代理，CMCTAG公司產(chǎn)品專注于標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體及標(biāo)簽抗體偶聯(lián)beads這一領(lǐng)域。其開發(fā)的標(biāo)簽抗體偶聯(lián)agarose beads（affinity gel）在科研以及臨床研究中享有很高的聲譽，更借助CMCTAG在標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體領(lǐng)域的優(yōu)勢，成為免疫印跡WB和免疫沉淀IP實驗試劑的專業(yè)供應(yīng)商。因卓越的產(chǎn)品質(zhì)量及良好的客戶口碑，CMCTAG敢于執(zhí)行倒賠政策，抗體承諾客戶不滿意即可申請無條件全額退款，如若產(chǎn)品質(zhì)量證實有瑕疵，則除了無條件全額退款以外，還會倒賠客戶一定金額。

維景生物是一家專注標(biāo)簽抗體偶聯(lián)beads（affinity gel），標(biāo)簽抗體，HRP直標(biāo)標(biāo)簽抗體，內(nèi)參抗體等抗體銷售,及WB,IP,Co-IP,ChIP實驗外包服務(wù)的高科技生物公司,咨詢熱線:021-52682952。業(yè)務(wù)咨詢 QQ :908869532

展開

產(chǎn)品說明

代做免疫印跡Western Blot實驗，代做WB實驗

Western Blot標(biāo)準(zhǔn)protocol

成功完成Western Blot檢測，必須滿足4個條件：

凝膠洗脫：轉(zhuǎn)移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無法在膜上進(jìn)行分析
吸附到膜上：在轉(zhuǎn)移過程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進(jìn)行分析
處理期間仍截留在膜上：在轉(zhuǎn)移后的處理過程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上
處理過程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無法檢測

成功進(jìn)行WB檢測，則設(shè)置合適正確的對照是必不可少的，只要正確設(shè)置了這些對照，即可快速和準(zhǔn)確的找到WB的問題所在，并保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和特異性！一般需要設(shè)置的對照如下：

陽性對照：明確表達(dá)檢測蛋白的組織或細(xì)胞，用于檢測抗體的工作效率
陰性對照：明確不表達(dá)檢測蛋白組織或細(xì)胞，用于檢測抗體的特異性
二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性
內(nèi)參對照：檢測標(biāo)本的質(zhì)量和二抗系統(tǒng)
空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質(zhì)和封閉的效果

WB檢測基本過程

1、獲取細(xì)胞或組織裂解物

1)根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer：

蛋白位置	推薦buffer
全細(xì)胞	NP-40 or RIPA
胞漿（可溶性蛋白）	Tris-HCl
胞漿（骨架結(jié)合蛋白）	Tris-Triton
膜蛋白	NP-40 or RIPA
核蛋白	RIPA or 核蛋白提取試劑盒
線粒體蛋白	RIPA or 線粒體分離試劑盒

亦可購買商業(yè)化的蛋白提取試劑盒來保證標(biāo)本制備的質(zhì)量

2)選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準(zhǔn)確性！

2、蛋白定量

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根據(jù)情況將標(biāo)本保存在-20°C /-80°C備用，進(jìn)行免疫沉淀（IP）或者直接進(jìn)行電泳分離蛋白

3、電泳分離蛋白質(zhì)

根據(jù)待測蛋白狀態(tài)確定電泳條件：

待測蛋白狀態(tài)	凝膠條件	上樣buffer	電泳buffer
Reduced - Denatured	還原，變性	含β-巰基乙醇或DTT，含SDS	含SDS
Reduced - Native	還原，不變性	含β-巰基乙醇或DTT，不含SDS	不含SDS
Oxidized - Denatured	不還原，變性	不含β-巰基乙醇或DTT，含SDS	含SDS
Oxidized - Native	不還原，不變性	不含β-巰基乙醇或DTT，不含SDS	不含SDS

根據(jù)待測蛋白分子量大小確定凝膠濃度

蛋白分子量（kDa）	凝膠濃度（％）
4-40	20
12-45	15
10-70	12.5
15-100	10
25-200	8

4、轉(zhuǎn)膜

根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性，選擇合適的膜類型。常用的轉(zhuǎn)移膜類型有：PVDF膜、硝酸纖維素膜（NC膜）和尼龍膜，其中PVDF和NC膜的使用頻率zui高。各種膜的技術(shù)參數(shù)及比較如下：

	PVDF膜	NC膜	尼龍膜
靈敏度和分辨率	高	高	高
背景	低	低	較高
蛋白結(jié)合能力	100-200ug/cm2（適用于SDS存在時與蛋白結(jié)合）	80-100ug/cm2	>400ug/cm2
機械強度	強	干的膜易脆	軟而結(jié)實
溶劑抗性	強	差	差
使用前是否需要浸潤	甲醛潤濕	緩沖液潤濕	緩沖液潤濕
適用染色方法	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁	不能用陰離子染料
適用檢測方法	顯色法、化學(xué)發(fā)光、熒光、放射性、化學(xué)熒光、快速免疫檢測	顯色法、化學(xué)發(fā)光、熒光、放射性	顯色、化學(xué)發(fā)光、放射性
適用范圍	普通蛋白WB、糖蛋白檢測、蛋白質(zhì)測序、氨基酸分析、重復(fù)檢測	普通蛋白WB、氨基酸分析、重復(fù)檢測。0.1um膜適用于7kDa以下蛋白	低濃度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖、核酸檢測常用
價格	高	較低	低

5、封閉

去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點，降低背景。常用的封閉溶液有：含BSA或者脫脂奶粉的TBST或TBS

6、一抗孵育

一抗的選擇成功與否，是整個WB實驗成功的關(guān)鍵：選擇一抗有以下幾個注意點：

選擇適合檢測標(biāo)本種屬的一抗（說明書有驗證）
選擇適用于WB實驗方法的一抗（說明書有驗證）
選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體

一抗的保存和使用：

根據(jù)說明書的要求條件進(jìn)行抗體的保存；一般需要將抗體分裝后放入-20度保存，避免反復(fù)凍融。
抗體的工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，在4度保存不要超過2周
根據(jù)說明書推薦濃度使用TBST稀釋一抗。由于實驗室條件和檢測方法等的差異，說明書推薦的稀釋比例只作參考，需要在說明書推薦的濃度周邊進(jìn)行多個濃度梯度的實驗檢測，然后選擇信噪比的抗體濃度進(jìn)行實驗。如果說明書沒有推薦濃度，可進(jìn)行多個稀釋比例進(jìn)行摸索稀釋度（1:100-1:3000）。
孵育條件：推薦4°C孵育過夜（一般大于18個小時），根據(jù)抗體親和力不同孵育時間有所區(qū)別

內(nèi)參的選擇和使用：WB過程監(jiān)測以及目的蛋白定量的標(biāo)準(zhǔn)！

WB常用內(nèi)參及其技術(shù)參數(shù)：

內(nèi)參名稱	分子量大小	適用范圍
beta-actin	43kDa	胞漿和全細(xì)胞
GAPDH	30-40kDa	胞漿和全細(xì)胞
Tubulin	55kDa	胞漿和全細(xì)胞
VCDA1/Porin	31kDa	線粒體
COXIV	16kDa	線粒體
TBP	38kDa	細(xì)胞核

7、二抗孵育

根據(jù)說明書推薦濃度使用TBST稀釋一抗。如果說明書沒有推薦濃度，可進(jìn)行多個稀釋比例進(jìn)行摸索稀釋度（1:1000-1:20000）。孵育條件一般為室溫1-2小時

8、底物孵育

選擇顯色或者化學(xué)發(fā)光底物。一般傾向于化學(xué)發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量

9、結(jié)果分析和檢測

凝膠成像系統(tǒng)檢測或者暗室曝光到膠片

Note：從封閉開始，每步之間都需要用TBST進(jìn)行洗滌，3次，每次5min

上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)，借助中科院細(xì)胞與免疫學(xué)實驗平臺，擁有強大的資金背景支持和專業(yè)的團(tuán)隊等資源。公司面向市場，迅速發(fā)展，廣納英才，現(xiàn)已建成專業(yè)生命科學(xué)產(chǎn)品銷售團(tuán)隊，其中大部份是在生命科學(xué)市場上工作多年，有豐富的銷售經(jīng)驗，也有良好的客戶資源，銷售渠道覆蓋華東大部分工業(yè)以及科研客戶，團(tuán)隊中免疫學(xué)及相關(guān)專業(yè)碩士以上學(xué)歷人士達(dá)50%，有較強的技術(shù)支持能力，在針對專業(yè)技術(shù)服務(wù)中能夠提供完善周到的專業(yè)化服務(wù)，對客戶在使用產(chǎn)品過程中提出的問題能滿意答復(fù)，并可及時傳遞新的產(chǎn)品技術(shù)資料信息?！　?/div>

上海維景生物科技有限公司憑借優(yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)平臺和專業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊，維景生物傾情打造zui高質(zhì)量的技術(shù)服務(wù)。至今，已為廣大科研客戶和合作伙伴提供了實時定量 PCR、細(xì)胞凋亡、 Western-blot 、 Elisa 、免疫組化、原位雜交、質(zhì)粒載體的構(gòu)建、穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選、 siRNA干擾效率的鑒定、雙螢光報告系統(tǒng)、蛋白表達(dá)及純化、腺病毒 / 腺相關(guān)病毒 / 慢病毒的包裝服務(wù)、單多克隆抗體的制備、 SCI文章的修改及發(fā)表服務(wù)等。

生物實驗技術(shù)服務(wù)項目列表

預(yù)實驗！常用抗體！

分子克隆技術(shù)服務(wù)：載體構(gòu)建、定點突變、RT-PCR、熒光定量PCR、SNP分型等；

蛋白免疫學(xué)實驗服務(wù)：Western Blot檢測、免疫組化檢測、流式檢測與分選，細(xì)胞凋亡檢測與分析、抗體制備等。

細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)：細(xì)胞培養(yǎng)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞株構(gòu)建、三維培養(yǎng)、病毒包裝（慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄和腺病毒）、細(xì)胞分選與培養(yǎng)、細(xì)胞侵襲與催化、共聚焦檢測等技術(shù)

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