古朵闡述——做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意那些問題

  上海古朵生物科技有限公司的ELISA試劑盒質(zhì)量可靠 靈敏度高 效果穩(wěn)定 實(shí)驗(yàn)好.那做做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意那些問題呢?下面跟隨古朵技術(shù)小編一起來探討了解一下吧!

  一 樣品稀釋

   一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性.

  二 試劑盒平衡

  Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

  三 樣品和試劑的混勻

  在稀釋前 后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性.

  四 加樣

  加樣是一項(xiàng)很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

  五 溫育

  溫育是ELISA中影響成敗的為關(guān)鍵因素.ELISA作為一種固相免疫,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間.

  六 洗板

  固相免疫技術(shù)是一種非均相免疫技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA的特異性.洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時(shí)換吸水紙,尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果.

  七 顯色

  顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時(shí)間過短,結(jié)果偏低;顯色時(shí)間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.

  八 比色

  比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)換.因此,容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問題.

  ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。