二、細胞培養操作

換液周期 2-3天

培養基體積 T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法 1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養瓶放入37度培養箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養基終止胰酶消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的完全培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；

8.補足完全培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；

注意事項 不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。

三、細胞凍存操作

凍存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%完全培養基+8%DMSO(高手建議);

凍存規格 200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法 1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存

注意事項 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案
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