Takara Cellartis? 人源心肌細(xì)胞來自人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）的人類干細(xì)胞系。iPS細(xì)胞已分化為自發(fā)搏動的心肌細(xì)胞。隨后這些細(xì)胞被分離成單細(xì)胞懸液并在小瓶中冷凍。心肌細(xì)胞是機體具有活力的細(xì)胞。它們是高度分化的高氧含量的細(xì)胞，擁有大量的線粒體。心肌細(xì)胞占有心臟重量的75%，但僅為心臟細(xì)胞數(shù)量的1/3。高度分化

 華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司為中國再生醫(yī)學(xué)和生物工程技術(shù)領(lǐng)域的組織器官再生研究、組織器官功能重建研究、干細(xì)胞技術(shù)研究、組織工程生物支架材料研究、器官移植醫(yī)療器械產(chǎn)品等再生醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈的相關(guān)客戶提供： iPS/ES胚胎干細(xì)胞的種子細(xì)胞、心肌細(xì)胞、MSC間充質(zhì)干細(xì)胞、基底膜基質(zhì)膠細(xì)胞支架、干細(xì)胞生長分化調(diào)控因子、功能膠原蛋白生物材料、器官模型3D打印技術(shù)材料、生物醫(yī)學(xué)試劑耗材儀器等種類豐富的產(chǎn)品，以“Focus on Tissue and Organ Regeneration 專注組織器官再生與功能重建”為己任，我們與客戶攜手為中國再生醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展而前行。

Takara Cellartis® 人源心肌細(xì)胞 Y10075 Human Cardiomyocyte

【產(chǎn)品簡介】

Takara Cellartis® 人源心肌細(xì)胞來自人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）的人類干細(xì)胞系。iPS細(xì)胞已分化為自發(fā)搏動的心肌細(xì)胞。隨后這些細(xì)胞被分離成單細(xì)胞懸液并在小瓶中冷凍。心肌細(xì)胞是機體具有活力的細(xì)胞。它們是高度分化的高氧含量的細(xì)胞，擁有大量的線粒體。心肌細(xì)胞占有心臟重量的75%，但僅為心臟細(xì)胞數(shù)量的1/3。高度分化的心肌細(xì)胞幾乎沒有增殖能力，它們在a-腎上腺素的刺激下通過Ras/MEK途徑發(fā)生肥大生長。所有的心肌細(xì)胞都能自律性的將膜去化和復(fù)化。所有的心肌細(xì)胞收縮都是肌源性的，不受神經(jīng)系統(tǒng)刺激。心肌細(xì)胞具有復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)，從而調(diào)節(jié)其在心臟節(jié)律性的泵出功能中的作用。心力衰竭時，心肌細(xì)胞的肥大和凋亡導(dǎo)致心肌收縮功能的下降。更好地了解心臟信號系統(tǒng)有助于揭示心肌細(xì)胞死亡的細(xì)胞機制。

【產(chǎn)品訂購】

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	運輸條件
Y10075	Takara Cellartis® 人源心肌細(xì)胞	1 Kit	常溫25cm2培養(yǎng)瓶運輸
Y10063	人源心肌細(xì)胞維持培養(yǎng)基	90ml	2-8°C
Y10062	人源心肌細(xì)胞解凍基	32ml	2-8°C

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【產(chǎn)品應(yīng)用范圍】

1.需要用到人源心肌細(xì)胞的研究項目： 1. 由于人類心臟電生理學(xué)特性，其心肌細(xì)胞的去化時程與嚙齒類動物差異很大。由于缺失人類心肌系統(tǒng)，只能取用其他大型哺乳動物的原代分離心肌細(xì)胞替代。而這些細(xì)胞的來源都不穩(wěn)定，實驗結(jié)果的重復(fù)性也無法保證。基本沒有可能獲得并培養(yǎng)原代人源心肌細(xì)胞，以 Cellartis心肌細(xì)胞為代表的ES/hiPS-心肌細(xì)胞，是目前較的人源心肌細(xì)胞來源。人源心肌細(xì)胞的很多核心功能蛋白與小鼠等模式動物不同。例如，小鼠心肌細(xì)胞主要表達(dá)α重鏈肌球蛋白，以適應(yīng)高頻率的搏動，而人源心肌細(xì)胞主要表達(dá)β重鏈肌球蛋白，適應(yīng)低頻率的搏動。此外，以Ito 和Ik為代表的鉀離子通道在不同種屬動物及人源心肌細(xì)胞間的表達(dá)和功能差異大。

需要頻繁用到體外培養(yǎng)人源心肌細(xì)胞的研究項目： 大多數(shù)心臟研究的對象為心肌細(xì)胞, 當(dāng)對研究對象的要求為單一純化的心肌細(xì)胞時, Takara Cellartis心肌細(xì)胞是理想的選擇.傳統(tǒng)研究采用的心肌細(xì)胞, 存在: 分離技術(shù)復(fù)雜繁瑣、缺少有效的純化方法、體外培養(yǎng)困難等缺陷。尤其是對于心臟生理接近人類的大型哺乳動物而言，分離動物心肌細(xì)胞成本其高昂，而獲取的心肌細(xì)胞活性也更低。因此，Takara Cellartis心肌細(xì)胞是此類研究的理想的選擇。

需要用到長期心肌細(xì)胞模型的研究項目： 由于傳統(tǒng)原代心肌細(xì)胞在培養(yǎng)中存活時間短（成年動物僅有數(shù)小時，新生動物不超過1周），大多數(shù)耗時較長的心臟生理和病理學(xué)研究難以采用心肌細(xì)胞開展，而Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞的解決了這一問題，Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞可以方便的在體外進行穩(wěn)定培養(yǎng)，時間上可滿足任何長期實驗的需要。

Takara Cellartis系列產(chǎn)品在藥物開發(fā)方面的主要應(yīng)用： 作為一種標(biāo)準(zhǔn)化的人源細(xì)胞產(chǎn)品，Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞可以大的促進藥物研發(fā)、提高藥物效果評價和藥物毒性測試。從而在占大多數(shù)的療效低下和具有潛在毒性的化合物進入成本高昂的階段前，將它們排除出去。

三、Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞常見的應(yīng)用： 1. 基本細(xì)胞學(xué)實驗： 1.1. 細(xì)胞活力測定 1.2. 凋亡測定 1.3. ATP酶活性測定 1.4. 氧化應(yīng)激測定 1.5. 線粒體活性測定 2. 電生理學(xué)實驗： 2.1. 傳統(tǒng)膜片鉗記錄 2.2. 微電陣列

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【產(chǎn)品特征】

人源細(xì)胞	人心肌細(xì)胞與常用實驗動物的心肌細(xì)胞相比，存在較大生理學(xué)差異。例如，人心臟生理條件下每分鐘搏動60-90次，而小鼠為500-700次，大鼠為300-400次。心肌細(xì)胞從hiPSC誘導(dǎo)分化而成，具備動物細(xì)胞無法比擬的優(yōu)點。
純度高	心肌細(xì)胞純度達(dá)99%以上，可由搏動和表達(dá)GFP的細(xì)胞比例證實。
均一性好	可以提供大量組成穩(wěn)定的心肌細(xì)胞群體，產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)檢，保證后續(xù)實驗良好的重復(fù)性。
完全的心肌生理學(xué)活性	Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞具備大多數(shù)正常人類心臟中心肌細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)電生理學(xué)和生物化學(xué)特性，可以受到電興奮刺激而產(chǎn)生搏動，不同心肌細(xì)胞直接還可以傳導(dǎo)電興奮信號。可以用于多種生物化學(xué)和電生理學(xué)檢測。
培養(yǎng)簡易	Takara Cellartis人源心肌細(xì)胞產(chǎn)品以凍存細(xì)胞的形式運輸和保存，并提供配套的接種培養(yǎng)基和維持培養(yǎng)基。僅需常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施即可操作應(yīng)用。
穩(wěn)定性強 可長期培養(yǎng)	可以被長期體外培養(yǎng)。在理想條件下，可維持存活達(dá)到3個月以上，并且保持節(jié)律性的搏動，是長期藥物毒性實驗和生理學(xué)研究的理想模型工具。

【細(xì)胞培養(yǎng)】

一、cellartis人源心肌細(xì)胞培養(yǎng)

cellartis心肌細(xì)胞解凍， 使用人源心肌細(xì)胞解凍基（Y10062）解凍后的第二天

人源心肌細(xì)胞可用于解凍后第三天開始（一次介質(zhì)改變后2天）。介質(zhì)應(yīng)改為2或3次/天。心肌細(xì)胞可在培養(yǎng)基中維持推薦條件下解凍后至少14天。流程圖如圖1所示。

圖1 心肌細(xì)胞的cellartis工作流

二、細(xì)胞培養(yǎng)容器的涂層

1.稀釋要求：杜貝爾科磷酸鹽緩沖鹽水+纖連蛋白量（終濃度50μg/ml）。

2.加纖連蛋白溶液的細(xì)胞培養(yǎng)容器（0.3ml/cm²，對應(yīng)15μg/cm²）,確保整個表面被覆蓋。

3.培養(yǎng)條件：37°C ± 1°C and 5% CO₂ for >3 hr

4.在使用前從細(xì)胞培養(yǎng)容器中取出纖連蛋白溶液。

三、Cellartis CM介質(zhì)的制備

1.解凍Cellartis 解凍基

2.凈化所有的瓶子和一個合適的消毒劑和地點的外表面為生物安全柜。

3.加入8mlFBS每32毫升Cellartis CM解凍庫,完成Cellartis CM的解凍液。

4.Cellartis解凍介質(zhì)應(yīng)存放在4°C

5.丟棄變質(zhì)的Cellartis CM解凍液。

四、Cellartis CM培養(yǎng)基

1.解凍Cellartis CM的培養(yǎng)基。

2.凈化中適當(dāng)補充瓶的外表面消毒劑放入生物安全柜。

3.加入10mlFBS/90mlCellartis CM培養(yǎng)基，完成Cellartis CM培養(yǎng)基。

4.Cellartis CM 培養(yǎng)基保存在4°C

5.丟棄變質(zhì)的Cellartis CM培養(yǎng)基。

五、Cellartis人源心肌細(xì)胞解凍

建議多兩到三個小瓶解凍一次。推薦的播種密度是1.2 - 1.5×10⁵viable cells/cm2cript:void(0);">

?準(zhǔn)備Cellartis CM解凍介質(zhì)中加入適當(dāng)體積后Y—27632至終濃度為10μM.溫暖到室溫（RT，15–25°C）。

?涂上適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞培養(yǎng)容器

1.轉(zhuǎn)運時，盡快將冷凍瓶中的液氮從37°C降至1°C水浴用鉗。

2.輕輕地推動小瓶在水的表面下，解凍細(xì)胞，而不旋轉(zhuǎn)小瓶。不要把小瓶的蓋子浸入水浴中，因為這樣會污染人源心肌細(xì)胞。

3.解凍完成后，將小瓶從水浴中取出（約3分鐘，瓶外仍應(yīng)冷）。

4.用適當(dāng)?shù)南緞┎潦眯∑浚湃肷锇踩駜?nèi)。

5.用吸管輕輕地將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌的50ml試管中。

6.隨著Cellartis CM的解凍液1 ml沖洗瓶（10μM Y-27632）和將它添加到滴細(xì)胞懸液。

7.添加Cellartis CM解凍液8ml（10μM Y-27632）。

8.離心管在200g時離心為5分鐘，去除上清液。

9.懸浮細(xì)胞球Cellartis CM的解凍液（10μM Y-27632），

10.計數(shù)細(xì)胞并測量存活率。

11.添加Cellartis CM的解凍液（10μM Y-27632）所需的細(xì)胞密度和種子

細(xì)胞，使用0.4 - 0.6ml/cm²,確保整個表面覆蓋介質(zhì)。

12。將細(xì)胞培養(yǎng)單位轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱37°C ± 1°C >濕度90%,24小時。

注：人源心肌細(xì)胞可在解凍后第三天開始使用（一次培養(yǎng)后2天）

【其他所需材料】

The following materials are required but not supplied:

? Fetal Bovine Serum (FBS) (Life Technologies, Cat. No. 16140)

? Fibronectin (Sigma-Aldrich, Cat. No. F0895)

? PBS Dulbecco's with Ca²⁺ & Mg²⁺ (D-PBS +/+)

? PBS Dulbecco's w/o Ca²⁺& Mg²⁺ (D-PBS –/–)*

? Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red*

? Y-27632

? Cell culture vessels, tissue culture treated polystyrene surface

? General cell culture equipment used in cell culture laboratory

* only needed if dissociating Cellartis Cardiomyocytes, see section

【關(guān)鍵點】

cript:void(0);">1.輕輕抽吸介質(zhì)的整個體積的培養(yǎng)容器和丟棄。

2.將人源心肌細(xì)胞添加到Cellartis CM的培養(yǎng)基中，0.4–0.6ml/cm²。

3.將細(xì)胞培養(yǎng)容器返回37°C ± 1°C >濕度90%的培養(yǎng)箱。

【相關(guān)產(chǎn)品】

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【問與答】

1. 人心肌細(xì)胞是否可以增殖？

答：人心肌細(xì)胞是終末分化的功能細(xì)胞，與人體內(nèi)的心肌細(xì)胞性質(zhì)相同，不能增殖擴增。

2. 人心肌細(xì)胞所含的細(xì)胞亞類有哪些？

答：通過 MLC2v、MLC2a 和 HCN4 蛋白的免疫熒光檢測，表明心肌細(xì)胞中含有 80 ~ 90%的心室肌樣

細(xì)胞、10 ~ 15%的心房肌細(xì)胞和<3%的竇房結(jié)樣細(xì)胞。

3. 人心肌細(xì)胞是否可以用自己配置的培養(yǎng)基？

答：HY StemCell 心肌細(xì)胞配套有心肌接種培養(yǎng)基、心肌維持培養(yǎng)基和 人心肌純化試劑盒，心肌系列培

養(yǎng)基可維持心肌細(xì)胞在體外長期性狀穩(wěn)定、并保持高純度。

3. 心肌細(xì)胞如何形成單層組織？

答：心肌細(xì)胞傳導(dǎo)動作電位需要細(xì)胞間形成連接，按照合適的密度接種人心肌細(xì)胞，可以形成均一的同步化跳動的單層心肌組織。請參考說明書并結(jié)合實際經(jīng)驗，摸索出合適的接種密度。

5. 接種后心肌細(xì)胞沒有跳動怎么辦？

答：人心肌細(xì)胞一般在接種后 2 ~ 3天開始跳動，不超過5天。換液、傳代和在培養(yǎng)箱外長期放置等導(dǎo)致細(xì)胞外環(huán)境變化的操作，會使心肌細(xì)胞停止跳動。

6.人心肌細(xì)胞可以在體外穩(wěn)定維持多長時間？

答：人心肌細(xì)胞能在3個月內(nèi)維持基因表達(dá)的穩(wěn)定性，6 個月內(nèi)維持特征與功能的完整性。考慮到非心肌細(xì)胞的增殖，2個月以上的研究項目需要每 6 -8周用 人心肌純化完全培養(yǎng)基進行一次純化處理。

7.心肌細(xì)胞停止搏動或搏動緩慢？

答：1）心肌細(xì)胞在再接種操作后，需要 1 ~ 3 天才能恢復(fù)搏動；2）心肌細(xì)胞在換液操作后、或在培養(yǎng)箱外放置過久，會減緩搏動或停止搏動，需要 2 ~ 3h 才能恢復(fù)正常搏動；3）心肌細(xì)胞長時間在人心肌純化完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，搏動會減緩，需及時停止純化，在心肌維持培養(yǎng)基中恢復(fù) 4 天以上，才能再次純化。

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參考產(chǎn)品：

CDI scientists have used iPS cell technology to develop iCell® Cardiomyocytes. These human heart cells recapitulate apparently healthy human cardiac biology and overcome the limitations of existing heart cell models, offering these benefits:

1.95% pure population of ventricular, atrial, and nodal cells

2.Clinically relevant cardiac disease phenotypes

3.Relevant clinical targets for cardiovascular disease

4.Highly reproducible across a wide range of applications

CardioEasy®人心肌細(xì)胞是一種即用型的高純度心肌產(chǎn)品。采用賽貝生物（Cellapy®）的心肌定向分化和純化方法產(chǎn)生。同時，包括hiPS細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞培養(yǎng)分化過程采用化學(xué)成分確定的培養(yǎng)試劑。

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