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96T大鼠beta-纖維蛋白原(β-FIB)酶聯免疫分析

發布日期:2012-12-29 瀏覽次數 :1169


本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 beta-纖維蛋白原(β-FIB)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 beta-纖維蛋白原(β-FIB)水平。用純化

的大鼠 beta-纖維蛋白原(β-FIB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中

依次加入 beta-纖維蛋白原(β-FIB),再與 HRP 標記的 beta-纖維蛋白原(β-FIB)抗體結

合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 

的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 beta-

維蛋白原(β-FIB)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準

曲線計算樣品中大鼠 beta-纖維蛋白原(β-FIB)的濃度。

試劑盒組成

30 倍濃縮洗滌液

20ml×

終止液

6ml×

酶標試劑

6ml×

標準品(40pg/ml 0.5ml×

酶標包被板

樣品稀釋液

顯色劑 

顯色劑 

標本要求

12 孔×

6ml×

6ml×

6ml×1/

標準品稀釋液

10  說明書

11  封板膜

12  密封袋

1.5ml×

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

20pg/ml 

10pg/ml 

5pg/ml 

2.5pg/ml 

1.25pg/ml 

號標準品

號標準品

號標準品

號標準品

號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl

然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37溫育 3分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3

8. 洗滌:操作同 5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

 

96T大鼠beta-纖維蛋白原(β-FIB)酶聯免疫分析 試劑盒使用說明書

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 

大于標準品孔一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(倍)后再測定,計

算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:個月