人胰島素原,PIELISA試劑盒
發布日期：2012-12-18 瀏覽次數 ：1241
人胰島素原,PIELISA試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供代測，7個工作日出結果，提供原始數據！ 檢測范圍：每種的檢測范圍都有所不同,具體請查看說明書 特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的指標，且與其他相關蛋白無交叉反應。 有效期：6個月 預期應用：ELISA法檢測指標血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中含量或靈敏度。 人胰島素原,PI實驗原理 用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗指標抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。 2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。 4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。 需要而未提供的試劑和器材 1. 標準規格酶標儀 2. 高速離心機 3. 電熱恒溫培養箱 4. 干凈的試管和Eppendof管 5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器 6. 蒸餾水，容量瓶等 1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 人胰島素原,PI洗板方法 手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 本品用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗HVA抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗HVA抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HVA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 1. 酶標儀（建議參考儀器使用說明提前預熱） 2. 微量加液器及吸頭，EP管 3. 蒸餾水或去離子水，全新濾紙
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