從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，我們提供給客戶。

上海閃晶分子生物科技有限公司簡介 上海閃晶分子生物科技有限公司，座落在漕河徑開發區(原址：上海生物工程研究院），是專業從事生物技術服務的公司；公司擁有一批知名度較高的學科帶頭人和一支訓練有素、多學科配合、以中青年科技人員為主的研究隊伍。公司自研究所改制以來在分子生物學試劑盒、熒光定量PCR、siRNA載體構建、全基因合成拼接、熒光探針修飾、多肽合成、dNTP、Pfu酶、熱啟動Taq酶、DNA marker、基因工程、原生質體的培養、細胞融合、單克隆抗體診斷試劑等研究方向作了深入的研究； 閃晶生物地理位置圖,點擊放大！ 閃晶生物地理位置圖,點擊放大! 公司擁有從事基因工程、細胞工程、單克隆抗體研究的現代化實驗室和先進的精密設備，如：實時PCR 擴增儀、多肽合成儀、 DNA 合成儀、 DNA 序列分析儀、 FPLC 、高壓液相色譜儀、凍干機、 CO2 培養箱、大型搖床等。 上海閃晶生物自2004年成立以來，一直致力于“如何將科研技術轉化成生產力”的工作，可喜的是閃晶公司在短短的幾年內已經成功地完善了一系列的服務項目和試劑盒；公司始終堅持自己的理念：“專業公司，打造專業服務”。如果你有新的技術、新的項目或產品，需要合作轉化，請與我們聯系。 上海閃晶分子生物科技有限公司 地址:上海市閔行區北橋鎮吳河路328號A棟2樓 郵編:201109 電話：021-54460831、54460832 免費電話：8009881995 E-mail: master@shinegene.org.cn or shinegene@vip.163.com 微信公眾號:分子生物,僅提供技術資料和資訊.

蛋白表達與純化技術服務 --zui低3000.00/蛋白，無風險！

步驟1. 目標基因全基因合成：

1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，我們提供給客戶。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化，密碼子優化。
3. 合成設計好的基因序列。

提供給客戶：目標基因（在T載體或常規穿梭載體上）及測序報告。 
價格：3.80元/堿基,如果客戶直接提供構建好的質粒，則免去這部分費用． 
時間：2~3周，根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務
步驟2. 目標基因亞克隆：

1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 閃晶生物提供如下表達載體：

expression Vector	Promoter	Tag
pET3a, pET11a, pET24a	T7/ac	None or T7 Tag
pET32a	T7/ac	TRX & HIS
pET41a	T7/ac	GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b	T7/ac	Secret
pET28a, pET15b, pRSETb	T7/ac	HIS
pET50b, pET43a	T7/ac	Nus, HIS
pPEPTIDE	T7/ac	HIS
pMAL-c2x	T7/ac	MBP
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P	T7/ac	GST
pQE30	T5	HIS
pTrcHisB	Trc	T7, HIS
pTWIN	T7/ac	Intein, CBD
pBV220	PRPL	None

提供給客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。 
價格：  
時間：1-2周 
步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選：

1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株：DH5α, 0, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供給客戶：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。 
價格： 
時間：1周 
步驟4. 目標蛋白表達及純化：

1. 搖瓶培養1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

提供給客戶：純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。 
價格：
1. 如果目標蛋白含有親和標簽（His-tag or GST-tag） 
5,000元（目標蛋白純度>80%，不切除標簽） 
5,500元（目標蛋白純度>90%，不切除標簽） 
6,000元（目標蛋白純度>80%，切除標簽） 
6,500元（目標蛋白純度>90%，切除標簽） 
2. 如果目標蛋白不含有親和標簽 
8,000元（目標蛋白純度>80%） 
9,000元（目標蛋白純度>90%） 
3. 如果沒有獲得目標蛋白，則不收取任何費用(僅限客戶直接提供構建好的質粒時)。 
時間：2~3周, 蛋白表達訂單下載 
備注：
1. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同，我們終根據實際情況將給客戶提供少1mg，多10mg的目標蛋白，所收取的費用是相同的。 
2. 我們提供的終產品一般為保存于常規的緩沖液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液）中蛋白質溶液，并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。 
3. 每次Western blot檢測多7個樣品，因為要加入陽性對照，陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次檢測，如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以為客戶提供抗His-tag的一抗，如果客戶需要使用其他一抗，則需要客戶提供。詳見 Western Blot 檢測服務.

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