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河北Hs578Bst細胞價格
一.如何閱讀質粒圖譜
一步:先看 Ori 的位置,了解質粒的類型(原核/真核/穿梭質粒)。
第二步:再看篩選標記,如抗性,決定使用什么篩選標記。
--Ampr 水解β-內酰胺環,解除氨芐的毒性;
--tetr 可以阻止四環素進入細胞;
--camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物,使之失去毒性;
--neor(kanr)氨基糖苷磷酸轉移酶 使G418(長那霉素衍生物)失活;
--hygr 使潮霉素β失活。
第三步:看多克隆位點(MCS)。它具有多個限制酶的單一切點,便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入,會導致某種標志基因的失活,從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源DNA插入片段大小。質粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說,外源DNA片段越長,越難插入,越不穩定,轉化效率越低。
第五步:是否含有表達系統元件,即啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止信號,這是用來區別克隆載體與表達載體。在克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用哪種載體,要以實驗目的為依據。
二.如何選擇載體
把目的基因通過基因工程手段送到生物細胞(受體細胞),需要運載工具(交通工具)攜帶外源基因進入受體細胞,這種運載工具就叫做載體(vector)。基因工程所用的vector實際上是用來攜帶目的基因片段進入受體細胞的 DNA。
選擇載體主要依據構建的目的,同時要考慮載體中應有合適的限制酶切位點。如果構建的目的是要表達一個特定的基因,則要選擇合適的表達載體。
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