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人抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAformalinfixed)ELISA試劑盒說明書

用途：定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中 人抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAformalinfixed)ELISA試劑盒說明書含量

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人抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAformalinfixed)ELISA試劑盒說明書

操作方法：

一、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

二、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

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標本收集: 血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融，6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數)。
酶標儀(450nm波長濾光片)移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。

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