活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。組織活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DCFHDA進(jìn)行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的DCFHDA ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/520nm的最大激

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產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 熒光分光光度計 ● 熒光酶標(biāo)儀

樣本類型：

● 新鮮組織 ● 凍存組織

使用方法：

試劑準(zhǔn)備：

根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將DCFHDA探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現(xiàn)配現(xiàn)用。

樣本處理：

1、剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。

2、準(zhǔn)確稱取50-100mg組織，加入1mL勻漿緩沖液A，用勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿。

3、在100×g，4℃離心3分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL DCFHDA探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

2、在37℃避光孵育30分鐘。

3、置于熒光酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長為488nm、發(fā)射波長530nm檢測熒光強(qiáng)度。

【注】：

● 或使用熒光分光光度計等其他熒光檢測設(shè)備。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

● 如熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了儀器的檢測范圍，可將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。

2、取100μL進(jìn)行蛋白定量。

結(jié)果處理：

以熒光強(qiáng)度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強(qiáng)度。

【注】：

● 數(shù)據(jù)與蛋白濃度的單位無關(guān)。

● 此處以蛋白濃度數(shù)據(jù)作為校正系數(shù)，對不同樣品進(jìn)行均一化處理。

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