本產品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細胞膜進入細胞內，并被細胞內的ROS氧化，氧化產物可摻入染色體DNA中，熒光強度增大，產生明亮的綠色熒光。根據活細胞中綠色熒光的產生，可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。

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產品特點：

● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 熒光酶標儀 ● 熒光光度計

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

使用方法：

CellROX Green探針配制：

根據需要用量，用新鮮無酚紅無血清培養基或HBSS稀釋CellROX Green探針后充分混勻，避光保存備用。

2、探針使用終濃度200-1000倍稀釋。一般預實驗起始濃度按500倍即可。

【注】：

● 不能用含有血清的培養基稀釋探針。

● 也可以用HBSS緩沖液或PBS稀釋探針。

● 如果熒光太強，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

CellROX Green探針標記：

1、CellROX Green溶液可在新鮮無血清培養基、HBSS緩沖液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，終濃度200-1000倍稀釋，以此染色液更換細胞培養基或灌流液；也可直接向無血清細胞孵育液體或灌流液中加入CellROX Green探針溶液至所需濃度。

【注】：

● 檢測貼壁細胞時，熒光顯微鏡檢測可以原位染色也可以消化下來后染色，流式檢測消化下來后染色。

2、依據細胞ROS含量的不同，CellROX Green終濃度可選擇在200-1000倍稀釋的范圍，孵育時間可選擇30分鐘-4小時，在37℃或室溫進行避光孵育。

【注】：

● 如果熒光太強，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

3、孵育結束后，用PBS等新鮮緩沖液清洗細胞或組織。漂洗時間要短。

【注】：

● 也可以用HBSS/PBS洗滌細胞。

熒光顯微鏡觀察：

1、對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細胞，取25-50μL細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。

2、熒光顯微鏡下觀察。

流式細胞儀分析：

1、染色并洗滌細胞后用0.5～1 mL冷PBS重懸細胞（5～10萬）。

2、采用488nm波長激發，發射波長520 nm，測定待測細胞平均熒光強度。

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