本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等下游應用兼容。本試劑盒提取的蛋白含有高濃度的鹽成分,不可直接用于2D電泳。如下游實驗需要直接用于雙向電泳、等電聚焦,請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

產(chǎn)品特點：

1、使用方便,將蛋白提取的時間縮短至30分鐘。

2、含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。

● 蛋白酶抑制劑混合物避免反復凍融。

● 如果不能短時間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 本試劑盒提取的是血漿總蛋白,含有高豐度的白蛋白。電泳前可以蛋白稀釋液稀釋至約5μg/μL。

● 電泳加loading buffer后水煮時,蛋白液有時會變得非常粘稠,可以用65℃保存10分鐘代替沸水煮。

● 對于某些目的蛋白在血漿中含量很低的情況,或者目的蛋白與白蛋白分子量相近的情況,需要先去除白蛋白。

使用方法：

1、提取液制備：

每200μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取抗凝全血樣品,在4℃,1500×g條件下離心10分鐘,棄細胞沉淀,留上清。

【注】：

● 使用含抗凝劑的血液標本收集管,而且采血后必須立即輕輕顛倒采血管混合5-10次,以確保抗凝劑發(fā)揮作用。

● 冷凍保存后的抗凝收集的血漿,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如果有則需要離心去掉渾濁后再進行下游提取。

● 吸出血漿時用吸頭貼著液面逐漸往下吸,注意避免吸起沉淀成分。

3、取上清血漿,每100μL血漿樣本中加入100-200μL蛋白提取液,充分混勻后,在4℃條件下靜置5分鐘。

4、在4℃,14000×g條件下離心10分鐘。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到血漿蛋白。

6、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產(chǎn)品：HR0329。

● 蛋白濃度一般在20-30mg/mL。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被細菌污染。

7、根據(jù)相關實驗要求用蛋白稀釋液B稀釋血漿蛋白樣品至所需濃度。

常見問題分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。

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