Fluo-3,AM熒光探針采用可見光激發,與傳統的紫外光激發的熒光探針相比,儀器的適用范圍更廣泛,具有更強的探針吸收性能,使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化,從而降低了對活細胞的光毒性,檢測敏感度更高。

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檢測方法：

● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 激光共聚焦/流式細胞儀/熒光酶標儀/熒光顯微鏡等 ● 離心機 ● HBSS(無酚紅) ● PBS(1×,pH7.4)

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 探針為了便于觀察防止誤操作導致損失,在試劑盒中時是采用透明管包裝,收到后可以離心轉入干燥黑色避光密封或者用鋁箔包裹避光。

● 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 染色后立即進行分析。

● Fluo-3,AM探針容易受潮,穩定性較差,注意干燥保存。從冰箱取出后,請確認在干燥的環境放至室溫后再開封。

● Fluo-3,AM探針母液時要用干燥的新吸頭,不能使用含水的吸頭。

● 未使用完的Fluo-3,AM探針母液請擰緊螺旋蓋,避免受潮失效。母液遇水極易分解,如果長期不用,建議根據每次使用量分裝保存,用封口膜封口,并用鋁箔紙包裹,放在一個密閉性能好的塑料袋中,并放入一包干燥劑,在≤-20℃密閉避光保存。

● Fluo-3,AM探針工作液含水,配制后不可以長期保存,需現配現用。

● Fluo-3,AM融解后離心至管底部再打開螺旋蓋,防止開蓋時損失。

● 可在染色溶液中加入等體積的20% Pluronic F127溶液(可選步驟),Pluronic F127可以幫助Fluo-3,AM更快進入細胞,不建議在Pluronic F127中長期保存Fluo-3,AM溶液。

● 標記的條件因細胞種類而異,根據不同樣本的實際染色結果做相應調整,在每次實驗前,請先確定最佳條件。在正式試驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養時間等,找到最佳實驗條件。以下方法僅供參考。

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