貨號:BTN90805-1N
規格:1mL
英文:Ready-to-use PCR Kit
即用型PCR試劑盒廠家優惠價格包含Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分, 用戶只需加入模板和引物即可進行PCR反應, 具有廣泛的用途。有以下特點：
1.擴增效率和靈敏度更高。
2.使用改良型PCR染料，與熒光PCR兼容，此染料功能類似溴酚藍，擴增結束后無需添加上樣液及電泳指示染料即可直接電泳檢測。
3.方便，用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR實驗。
4.快捷，操作步驟已經zui大限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。
5.本產品A型含電泳染料,PCR反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
6.產物可直接用于T載體克隆，不需要額外的加A反應。
即用型PCR試劑盒廠家優惠價格的規格及成分：
1.PCR MagicMix×1mL
2.專用染料×40μL
注：本產品分A和B兩種
A型PCR MagicMix含有專用染料；
B型PCR MagicMix不含專用染料，染料單獨提供。
運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年
即用型PCR試劑盒廠家優惠價格的使用方法：
自備試劑：DNA模板、引物、超純水。
以30 uL的標準PCR反應體系為例：在一干凈的PCR管中，加入下列成分：
PCR MagicMix×15μL
DNA模板(自備)
哺乳動物基因組DNA×0.5～1ug
酵母基因組DNA×5～500ng
細菌基因組DNA×0.5～50ng
質粒DNA×5～500pg
PCR回收片段×1～100pg
PCR引物(自備)×10 pmol each
補水到30μL
放入PCR儀中進行PCR, 結束后取5-10 uL直接上樣電泳（A型產品不需要額外再加DNA上樣液）, 紅色染料電泳速度相當于50 bp DNA片段。B型產品用戶按照1.5mL PCR MagicMix加入60μL專用染料。
注意：
1．如果反應體系不是30uL，各成分需要等按比例增加或減少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物（植物、土壤和血液等DNA樣品常含此類抑制物），可以在PCR體系中加入1/10的PCR抑制物清除劑（BTN60804，30uL體系中加3uL），可能會對PCR有幫助。
與即用型PCR試劑盒廠家優惠價格相關的資料，PCR反應的影響因素：
變性溫度與時間：模板變性溫度是決定PCR反應中雙鏈DNA解鏈的溫度，達不到變性溫度就不會產生單鏈DNA模板，PCR也就不會啟動。變性溫度低則變性不完全，DNA雙鏈會很快復性，因而減少產量。變性溫度太高，又會影響酶的活性。一般情況下可設為94℃ 20～30秒，高溫時間應晝縮短，以保持耐熱DNA聚合酶的活力，zui高變性溫度不宜超過95℃。
退火溫度與時間：退火溫度決定PCR特異性與產量。溫度高特異性強，但過高則引物不能與模板牢固結合，DNA擴增效率下降；溫度低產量高，但過低可造成引物與模板錯配，非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在45～68℃之間。設置特定反應的適退火溫度，可根據引物的（G+C）%含量進行推測，一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，退火時間一般為30～60秒，足以使引往返與模板之間完全結合，長時間退火沒有必要。
延伸溫度與時間：PCR反應的延伸溫度一般選擇在70～75℃之間，延伸時間根據所用聚合酶擴增速度和擴增片段大小設定，如同樣擴增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分鐘，使用Pfu酶則應設定2分鐘以上。延伸時間過長會導致非特異性擴增帶的出現，時間太短則可能得不到擴增產物或得到一些短的非特異性片段。
循環次數：可根據模板DNA的量、擴增片段的大小和擴增產物的下步應用等因互，設定20-40個循環。循環次數太少，擴增量不足，如果循環次數太多，錯配幾率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產物得率前提下，應盡量減少循環次數。
酶量：50 μL反應體系可用0.5-5 U酶，酶量的選擇與模板DNA的量，擴增片段大小等有關，酶量過多易發生非特異性反應，而且可能增加突變的機率，尤其在進行高保真擴增時，應盡量減少酶量，但酶量過少時反應性能下降。
模板：模板可以是單鏈DNA，也可以是雙鏈DNA，質粒DNA的擴增效率略低于線狀DNA。模板加量一般不需太多，不超過1 μg為宜，因為加量過多可能導致非特異性擴增增加，但是要考慮模板中靶序列的含量。例如，使用基因組為模板擴增單拷貝或低拷貝靶序列，就需要適當加大模板用量。
引物：引物與模板配對的長度應到少為17個核苷酸，zui高不宜超過30個核苷酸，長度為20～24個核苷酸，如需插入酶切位點，應在酶切位點5’端多加幾個堿基，有利于酶切。引物的（G+C）%含量組成應均勻，盡量避免含有相同的堿基多聚體。兩個引物中（G+C）%含量應盡量相似。引物內部應避免形成明顯的次級結構，如發夾結構。兩個引物之間不應發生互補，特別是在引物3’端。如果可能，引物3’端富有GC，這樣退火后有利于引物3’端的延伸。人工合成的引物經驗豐富色譜層析或PAGE純化，以除去未能合成至全長的短鏈等雜質。引物的終嘗試一般為0.1-2 μM左右，嘗試太高會導致非特異性擴增，太低則擴增產物太少。
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