產品名稱:人Jo1抗體/抗組氨酰tRNA合成酶抗體(Jo1/HRS)Elisa試劑盒
產品規格:48T/96T
產品用途:科研實驗
產品存儲:2-8℃,有效期六個月
使用方法
樣品收集、處理及保存方法應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗體,再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品濃度。
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀(450nm)
2.加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
組成
1.30倍濃縮洗滌液.20ml×1瓶.7.終止液.6ml×1瓶
2.酶標試劑.6ml×1瓶.8.標準品.0.5ml×1瓶
3.酶標包被板.12孔×8條.9.標準品稀釋液.1.5ml×1瓶
4.樣品稀釋液.6ml×1瓶.10.說明書.1份
5.顯色劑A液.6ml×1瓶.11.封板膜.2張
6.顯色劑B液.6ml×1/瓶.12.密封袋.1個
不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融標本要求
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
使用方法
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
5號標準品.150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
4號標準品.150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
3號標準品.150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2號標準品.150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1號標準品.150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。





