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人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒應用方法

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  • 更新日期:2023-08-15 10:36
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詳細介紹
中文簡稱:人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒

英文簡稱:IL-2sRα/CD25)ELISA KIT

特異性:Hu IL-2sRa;

檢測范圍:62.5pg/ml~4000pg/ml;

靈敏度:30pg/ml;標本用量:100ul/well;

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法的原理制備,適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細胞培養上清液中的天然和重組的IL-2sRa濃度。

白介素2(IL-2)是通過結合多分子細胞受體復合物發揮生物活力的。多年來,這個受體復合物被認為是由IL-2Rα與IL-2β兩個糖蛋白鏈組成的,兩個亞基相互結合在一起形成一個高親和力受體來傳遞IL-2信號的。IL-2Rα(也稱為Tac抗原或CD25),是一個分子量為55kD跨膜糖蛋白,有351個氨基酸組成。IL-2β在1989年被克隆出來,它是個由575個氨基酸組成的跨膜糖蛋白,分子量為75kD,其中有286個氨基酸位于胞漿內,顯著地參與了細胞信號傳導作用。常認為它是IL-2一種弱抑制劑。在任何情況下,體液中增高的可溶性IL-2Rα常伴隨這T細胞與B細胞的增加與免疫系統的激活。

ELISA實驗原理

人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素2可溶性受體α鏈(以下簡稱“A物質”)水平。用純化的A物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入A物質再與HRP標記的A物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的A物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中A物質含量。

ELISA試劑盒組成

人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒包括:

(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);

(3)酶的底物;

(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);

(5)結合物及標本的稀釋液;

(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

(7)酶反應終止液,常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。

結果判定方法

1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。

4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
 
 
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