植物總酚檢測試劑盒(比色法)產(chǎn)品簡介:
植物組織或果實中存在花青素、葉綠素、類胡蘿卜素、類黃酮、酚類等物質(zhì)，這些物質(zhì)與果實等樣品衰老過程密切相關(guān)，對其加工性能、存儲、營養(yǎng)價值等都有重要影響，植物酚類物質(zhì)具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用而廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

植物總酚檢測試劑盒(比色法)檢測原理是總酚(Total Phenol)溶于有機(jī)溶劑，以有機(jī)溶劑粗提總酚，根據(jù)提取液的吸收光譜特性，可利用分光光度計在特定波長(280nm)處測定其吸光度，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計算出總酚含量，主要用于植物組織或果實中總酚的提取以及定量檢測總酚含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：
1、實驗材料：桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織
2、天平、稱量紙、剪刀、研缽或勻漿器、離心管、離心機(jī)、濾紙或紗布
3、石英比色杯、紫外分光光度計

操作步驟(僅供參考):
1、總酚提取：
①取果實或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品0.25g，置于4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器。
②加入4℃預(yù)冷的2~3mlTPAssayBuffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入10ml離心管，用
TPAssayBuffer沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)移至離心管，補加TPAssayBuffer至8ml。
③4℃避光靜置20min，期間搖動2~3次，然后過濾至離心管中，也可用離心機(jī)8000r/min離心3min，濾液(上清液)即為總酚粗提液。
稀釋總酚標(biāo)準(zhǔn)溶液:將總酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)用TPAssayBuffer稀釋成總酚標(biāo)準(zhǔn)(50ug/ml)，取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，依次稀釋。
加入物(ml)123456    1    2    3    4    5    6    
總酚標(biāo)準(zhǔn)(50ug/ml)     0.1    0.2    0.3    0.4    0.5    0.6    
TP Assay Buffer    0.9    0.8    0.7    0.6    0.5    0.4    
總酚標(biāo)準(zhǔn)(50ug/ml)    5    10    15    20    25    30    

3、TP加樣：按照下表設(shè)置空白管、對照管、測定管；如果樣品中的總酚濃度過高，可以
減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測好能設(shè)置2平行管，求平均值。
加入物(ml)    空白管    標(biāo)準(zhǔn)管    測定管    
TPAssayBuffer    1    -    -    
系列總酚標(biāo)準(zhǔn)(1~6號管)    -    1    -    
總酚粗提液    -    -    1    

注意：如用較大的比色杯，可相應(yīng)增加試劑量，其后計算公式中V1=加樣時所用總酚粗提液的體積(ml)應(yīng)相應(yīng)發(fā)生變化。
4、TP測定：各管試劑加入光徑1cm的石英比色杯中，在5~15min內(nèi)，以空白管調(diào)零，用紫外分光光度計280nm處測定系列標(biāo)準(zhǔn)管、測定管的吸光度。

計算：
以1~6號管系列總酚標(biāo)準(zhǔn)濃度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計算出各測定管總酚含量(mg/ml)。
組織樣品的總酚(mg/g)={C×VT}/(W×V1)
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測定管總酚含量(mg/ml)
VT=總酚粗提液總體積(ml)=8
V1=加樣時所用總酚粗提液的體積(ml)=1
W=樣品鮮重(g)
液體樣品的總酚(mg/ml)=C×N/V
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測定管總酚含量(mg/ml)
V=加樣時所用總酚粗提液的體積(ml)=1
N=稀釋倍數(shù)

注意事項：
1、為了避免總酚見光分解，操作時應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿時應(yīng)盡量縮短時間。
2、取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)總酚含量適當(dāng)調(diào)整。
3、TPAssayBuffer應(yīng)密閉保存，避免有效成分揮發(fā)。
4、測定時，比色皿上應(yīng)加蓋，防止揮發(fā)。
5、測定應(yīng)及時，時間延長，總酚濃度高時，測定結(jié)果可能偏低。
6、植物總酚濃度在10~20ug/ml范圍是，OD值基本穩(wěn)定，超出范圍時結(jié)果有稍微變化。
7、如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)儀測定。
8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。