植物花色苷含量檢測試劑盒(微量法)

保質期:6個月有效

產品簡介:
花色苷是一類可食用的易溶于水等溶劑的天然色素。花色苷使植物呈現多彩的顏色，本身具有多種保健作 用，因而在天然食用色素、保健品和醫藥行業都有著廣闊的應用前景。
根據花色苷在不同pH下的結構性質測定花色苷含量，在pH為1時花色苷在530nm處有大吸收峰,而當pH為4.5 時，花色苷轉變為無色查爾酮形式在530nm處無吸收峰，通過測定不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值計算樣本中花色苷的含量。

自備材料：
1、可見分光光度計/酶標儀、
2、離心機、
3、水浴鍋、
4、可調式移液器、
5、微量玻璃比色皿/96孔板、
6、研缽/勻漿器和蒸餾水。

操作步驟(僅供參考):
1.  可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，可見分光光度計蒸餾水調零。
2.  加樣表：在96孔板中分別加入
試劑名稱(μL）    測定管1    測定管2    
樣本    20    20    
試劑一    180    -    
試劑二    -    180    
充分混勻后測定測定管 1 和測定管 2 分別在 530nm 和 700nm 處的吸光度，測定管 1 在 530nm 和 700nm 處的吸光值記為 A1、A1’，測定管 2 在 530nm 和 700nm 處的吸光值記為 A2、A2’，計算 ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。

花色苷含量計算
A、以微量玻璃比色皿計算：
按樣本質量計算：
花色苷含量(μmol/g量）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W

按樣本蛋白濃度計算
花色苷含量(μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷(Cpr×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀釋倍數，該反應體系下為10；d：比色皿光徑，1cm；W：樣本質量，g；ε：花色苷的摩爾消光系數，2.69×104mL/mmol/cm；V提取：提取液總體積，1mL；103：單位換算系數，1mmol=103μmol；Cpr：樣本蛋白濃度， mg/mL（蛋白濃度需用PBS單獨提取后自行測定）。

以96孔板計算：
按樣本質量計算
花色苷含量(μmol/g 質量）=[ΔA÷(ε×d)×103 ×F] ×V提取÷W=0.062×ΔA× F÷W

按樣本蛋白濃度計算
花色苷含量(μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103 ×F] ×V提取÷(Cpr×V提取)=0.062×ΔA×F÷Cpr
F：稀釋倍數，該反應體系下為10；d：96孔板光徑，0.6cm；W：樣本質量，g；ε：花色苷的摩爾消光系數， 2.69×104mL/mmol/cm；V提取：提取液總體積，1mL；103：單位換算系數，1mmol=103μmol；Cpr：樣本蛋白濃度， mg/mL（蛋白濃度需用PBS單獨提取后自行測定） 。

實驗實例：
取 0.1g葡萄皮加入1mL 提取液充分勻漿后轉移到 EP管中，封口膜封口防止揮發，60℃浸提 30min，期間可 震蕩數次，提取后提取液定容至1mL，離心取上清后按照測定步驟操作，用 96 孔板測得計算 ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.573-0.060）-（0.120-0.060）=0.453，按樣本質量計算含量得：
花色苷含量(μmol/g質量）=0.062×ΔA×F÷W =0.062×0.453×10÷0.1=2.81μmol/g質量。

注意事項:
1、 注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
2、 如果A1大于1，可以適當加大稀釋倍數，保證總體積200μL不變，如10μL上清液和190μL試劑一（相當于稀釋 20倍）；如果A1小于0.1，可以適當縮小稀釋倍數，保證總體積不變，如100μL上清液和100μL試劑一（相當 于稀釋2倍），使A1保持在0.1~1范圍內，可提高檢測靈敏度；注意應同樣調整上清液和試劑二體積比例；計 算時以實際稀釋倍數代入計算公式中。
3、 因提取液會使蛋白變性， 若使用蛋白濃度計算需用PBS單獨提取后自行測定。