果膠酶檢測試劑盒(DNS比色法)
保質(zhì)期:：6個(gè)月有效；4℃運(yùn)輸，4℃保存。
產(chǎn)品簡介:
天然果膠類物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí)、根、莖、葉中，是細(xì)胞壁的一種組成成分，它們伴隨纖維素而存在，構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物，使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱，實(shí)質(zhì)是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
果膠酶(PG)檢測試劑盒(DNS比色法)檢測原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸，與二硝基水楊酸(DNS)反應(yīng)形成有色化合物，該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比，于分光光度計(jì)540nm處測定吸光度，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中果膠酶活性，主要用于定量檢測植物組織或果實(shí)中果膠酶，反應(yīng)顏色越深，吸光度越大，果膠酶的活性越強(qiáng)，該50T試劑盒可以檢測約23~24次樣本。
該試盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋果、杏等果實(shí)或其他植物組織
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、離心機(jī)
6、水浴鍋
7、比色杯
8、分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
果膠酶提取：取果實(shí)或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品3g，置于提前4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器，加入3ml4℃預(yù)冷的PectinaseLysisBuffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入離心管或試管，4℃10000g離心10min，留取上清液，即為果膠酶提取液，
4℃保存待用。稀釋半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)液：取適量的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按下表進(jìn)行稀釋：
加入物(ml) 1 2 3 4 5
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
蒸餾水 0.49 0.48 0.47 0.46 0.45
半乳糖醛酸含量(μg) 10 20 30 40 50
PG加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對照管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測好能設(shè)置2平行管，求平均值。
加入物(ml) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 對照管 測定管
蒸餾水 0.25 - - -
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1~5號管) - 0.25 - -
果膠酶提取液 - - 0.25(提前煮沸5min) 0.25
Pectinase Lysis Buffer 0.75 0.75 0.5 0.5
Pectinase Assay Buffer 0.25 0.25
37℃水浴1h。
DNS顯色液 0.75 0.75 0.75 0.75
PG測定：立即沸水浴5min，自來水中將離心管或試管冷卻至室溫，以蒸餾水稀釋至12.5ml，混勻，比色杯光徑1cm，以空白調(diào)零，以分光光度計(jì)立即系列標(biāo)準(zhǔn)管、對照管、測定管在540nm處吸光度。
計(jì)算：
以1~5號管系列半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(10、20、30、40、50μg)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接計(jì)算直線回歸方程。以測定管吸光度減去對照管吸光度的差值作為測定吸光度值(A測定)，帶入回歸方程求得的測定管果膠酶含量，根據(jù)下述公式計(jì)算其活性：
組織樣品的果膠酶活性(μg/h.g)={m×V}/(W×t×VS)
式中：m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
V=果膠酶提取液總體積(ml)
W=樣品鮮重(g)
t=37℃水浴時(shí)間(h)=1
Vs=測定時(shí)所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.5
液體樣品的果膠酶活性(μg/h·ml)=m×N/V
式中：m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
N=稀釋倍數(shù)
V=測定時(shí)所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.5
注意事項(xiàng)：
1、取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)果膠含量適當(dāng)調(diào)整。
2、可溶性糖對測定結(jié)果有較大影響，應(yīng)徹di去除樣品中的可溶性糖。
3、PectinaseLysisBuffer應(yīng)密閉保存，避免有效成分揮發(fā)。
4、37℃水浴1h后，應(yīng)立即加入DNS顯色液。
5、如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的大檢測體積。
6、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
