產(chǎn)品名稱：人活化素A(Activin-A)Elisa試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

產(chǎn)品用途：科研實驗

產(chǎn)品存儲：2-8℃，有效期6個月

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗體，再與HRP標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品濃度。

 

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

自備物品

1.酶標儀（450nm）

2.加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

 

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（480pg/ml）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

 

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240pg/ml	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120pg/ml	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60pg/ml	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30pg/ml	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15pg/ml	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50靗，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40靗，然后再加待測樣品10靗（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50靗，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50靗，再加入顯色劑B50靗，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50靗，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。