全血乳酸檢測試劑盒(對羥基聯苯比色法)說明書

產品簡介：
全血乳酸檢測試劑盒(對羥基聯苯比色法)
乳酸(Lactic acid，LD)又稱 2-羥基丙酸是一種化合物，是一種含有羥基的羧酸，分子式是C3H6O3，參與生物化學很多反應過程。乳酸檢測有化學氧化法、酶催化法、電化學法、酶電極感應器法等。
全血乳酸檢測試劑盒(對羥基聯苯比色法)其檢測原理是將血液去除蛋白質后加入硫酸銅等試劑再除去葡萄糖和其他干擾物質，再向處理過的溶液中加入硫酸，加熱后乳酸被氧化為乙醛，后者與對羥基聯苯作用產生紫色的縮合物，其紫色縮合物的生成量與血液中乳酸濃度有關。將標準與樣品同樣處理，可通過比色分析計算出血液中的乳酸含量。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：
編號 名稱     50T    Storage    
試劑(A): 乳酸標準(1mmol/L)    2ml    4℃ 避 光    
試劑(B): 蛋白沉淀劑    50ml    RT 避 光    
試劑(C): 硫酸銅溶液    52ml    RT    
試劑(D): 氫氧化鈣    60g    RT    
試劑(E): LD 顯色液    5ml    RT 避 光    
使用說明書    1 份    

自備材料：
1、離心管或小試管
2、蒸餾水
3、濃硫酸
4、水浴鍋
5、離心機
6、分光光度計
7、比色杯

操作步驟(僅供參考)：
1、配制蛋白沉淀工作液：按蛋白沉淀劑：蒸餾水=1 : 4 比例配置，充分混勻，即為蛋白沉淀工作液。避光保存。該試劑有一定腐蝕性，請小心操作。
2、配制硫酸銅工作液：按硫酸銅溶液：蒸餾水=1 : 4 比例配置，充分混勻即成。
3、稀釋標準品：
①按下表稀釋乳酸標準(1mmol/L)，
加入物(ml)    1    2    3    4    5    
乳酸標準(1mmol/L)    0.02    0.04    0.06    0.08    0.10    
蒸餾水    0.98    0.96    0.94    0.92    0.90    
相當于全血乳酸的濃度(mmol/L)    1    2    3    4    5    
②取各標準 1ml 加入到離心管中，加入 1ml 硫酸銅溶液和 8ml 蒸餾水，混勻。再加入氫氧化鈣約 1g，用力振搖 30s。如果混合物不呈亮藍色，則應多加一些氫氧化鈣。
③室溫放置 30min，每隔 10min 振搖一次。5000 r/min 離心 5min，上清液備用。

4、樣品準備：
①取離心管，先加入 4.5ml 蛋白沉淀工作液，然后逐滴加入 0.5ml 血液，邊加邊搖，管蓋蓋緊后用力振搖 30s。室溫放置 5min，5000r/min 離心 3min。
②取上清液 2ml 加入到離心管中，加入 1ml 硫酸銅溶液和 7ml 蒸餾水，混勻。再加入氫氧化鈣約 1g，用力搖勻 30s。
③室溫放置 30min，每隔 10min 振搖一次。5000 r/min 離心 5min，上清液備用。

5、LD 加樣：按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的 LD 濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測好能設置平行管。

加入物(ml)    空白管    標準管    測定管    
蒸餾水    1    -    -    
系列標準上清液(1~5 號)    -    1    -    
樣品上清液    -    -    1    
硫酸銅工作液    0.05    0.05    0.05    
充分混勻，在不斷振搖的情況下加入濃硫酸各 8ml，振搖并混勻。沸水浴加熱 5min，自來水冷卻至 20℃左右。    
LD 顯色液    0.1    0.1    0.1    

LD 顯色液應直接加入酸中(勿沿管壁)，用力振搖以混勻沉淀物。各管置于 30℃水浴中孵育 30min，每 10min 振搖一次，使沉淀的試劑再次分散，溶液終顯紫藍色。如顯紅紫色則表明溫度太高，必須重做。然后再放入沸水中嚴格水浴 90s，此時溶液應完全清澈，顯紅紫色。流動自來水冷卻至室溫備用待檢。

6、LD 檢測：各管冷卻后，比色杯光徑 1cm，以空白管調零，用分光光度計測定標準管、測定管 565nm 處吸光度(即 A 標準、A 測定)。

計算結果：
標準曲線制作：以系列乳酸標準濃度為橫坐標，各管吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。根據標準曲線的回歸方程可計算得出樣品中的乳酸濃度。
亦可做固定濃度(2 mmol/L)的樣品對照，根據公式計算樣品中乳酸的濃度： 乳酸(mmol/L)=(A 測定/A 標準)×2×N
式中：A 測定=測定管的吸光度A 標準=標準管的吸光度N=樣品稀釋倍數

參考區間：
靜脈全血乳酸  0.55～2.2mmol/L(安靜狀態)

注意事項：
1、本方法檢測結果準確而特異，但是操作麻煩費時。
2、建議在安靜狀態時抽血并盡快制備無蛋白血上清液，及時檢測。當劇烈運動時血乳酸可達 11 mmol/L 以上，恢復時將迅速降低。病理狀態下血酸亦可上升為 2~26 mmol/L， 通常在 7 mmol/L 時，臨床上出現乳酸性酸中毒。
3、糖尿病酮癥酸中毒昏迷時，血乳酸增高，一般不超過 7 mmol/L。嚴重肝臟病時，可引起血乳酸增加，尿毒癥患者亦常伴有乳酸酸中毒。
4、應采用含氟化鈉的抗凝劑，可防止血液樣本在放置期間葡萄糖酵解轉變為乳酸，造成假性增高。
5、每個樣品中氫氧化鈣的加入量不需要準確稱量，以混合物呈亮藍色為準。
6、LD 顯色液與酸接觸時即產生沉淀，故應滴加在液面上并立即搖勻，使沉淀物盡快分散成小顆粒；在 30min 放置期間，應不時振搖使顆粒漸漸消散；后沸水浴 90s，使顆粒完全消失，液體透明。

有效期：4℃保存，6 個月有效。低溫運輸。