人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒介紹

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【測定原理】
本試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人PICP單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的人PICP與單抗結(jié)合，加入生物素化抗人PICP多抗，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的生物素抗體與之結(jié)合，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍(lán)色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，人PICP濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中人PICP濃度。

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【試劑盒組成】
1.酶標(biāo)板：一塊（96孔/48孔），已包被抗人PICP單抗。使用前傾去孔中液體，用洗滌液洗板1次，濾紙上拍干。剩余板條密封好，4oC保存（孔中保留保護(hù)液）。
2.樣品稀釋液：一瓶（5ml）
3.一抗體工作液：一瓶（5.5ml/2.7ml）
4.酶標(biāo)抗體工作液：一瓶（10.5ml/5.5ml）
5.底物液：二瓶/一瓶（5.5ml）
6.終止液：一瓶（6ml/3ml）
7.洗滌液（20 x）：一瓶（50ml/25ml）
8.標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉，1000 ng/ml）：二管/一管
9.坐標(biāo)紙：一張
10.封板紙：一張

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【樣品的準(zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
1.血清：用干凈試管收集血液，室溫凝固30分鐘，離心1000×g 15分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
2.血漿：采用EDTA抗凝，抽血后30分鐘內(nèi)離心1000×g 15分鐘。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
3.細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液：離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【試劑的準(zhǔn)備】
1.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前每管中加入蒸餾水400ul溶解后即可。
2.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【操作步驟】
1.實驗前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫（20-25℃）。
2.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，一孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復(fù)作對倍稀釋至第七孔，后，從第七孔中吸出100ul棄去，使之體積均為100ul。第八孔為空白對照。
3.加樣：待測品孔中每孔各加入待測樣品100ul。
4.將反應(yīng)板置37℃120分鐘。
5.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
6.每孔中加入一抗體工作液50ul。
7.將反應(yīng)板充分混勻后置37℃ 60分鐘。
8.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
9.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。
10.將反應(yīng)板置37 ℃60分鐘。
11.洗板：同前。
12.每孔加入底物液100ul，置37℃暗處反應(yīng)5-10分鐘。
13.每孔加入50ul終止液混勻。
14.在450nm處測吸光值。（應(yīng)盡快，時間過長可能導(dǎo)致本底偏高）

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【結(jié)果判斷】
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 ng/ml之OD值在半對數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。將濃度作為X軸（對數(shù)軸），OD值作為Y軸（線性軸）。曲線應(yīng)為一光滑曲線。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)人PICP含量。

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【注意事項】
1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.底物液使用前建議先行檢查，若溶液顏色發(fā)藍(lán)則已失效，棄去。
3.本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制。
4.本試劑盒含2M硫酸，不要將它與含疊氮化鈉的廢物混在一起。
5.不同批號的試劑盒組份不能混用。
6.正確拿酶標(biāo)板：不要接觸板的底部，否則會影響讀數(shù)。

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【有效期及貯存條件】
本試劑盒宜置2~8℃冷藏，可保存半年。試劑盒開封后請短期內(nèi)做完。

人I型前膠原肽(C端)定量酶聯(lián)檢測試劑盒【性能參數(shù)】
靈敏度：zui小可測人PICP達(dá)4 ng/ml。
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)<10%。
板間變異系數(shù)<15%。

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