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轉化生長因子α(TGF-α)的測定

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  • 更新日期:2014-03-05 15:04
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 轉化生長因子α(transforming growth factor-α,TGF-α)的結構和功能與TGF相似,屬EGF家族。檢測EGF生物學活性的方法也可以檢測TGF-α的活性。此外,EGF能誘導3T3小鼠的J2細胞合成DNA,TGF-α與EGF競爭受體,抑制EGF的作用,故可通過抑制EGF誘導的DNA合成試驗檢測TGF-α的活性。

    1.將3T3J2細胞培養在含0.5%FCS的DMEM培養液中,用0.25%胰蛋白酶消化細胞,用細胞培養液洗滌細胞2次,并配成6×104/mL。

    2.于24孔培養板每孔加入0.5mL細胞懸液,用細胞培養液作系列稀釋的TGF-a待測樣品或標準晶0.5mL、1nmol/LEGF和luCi(37kBp)3H-TdR,并設置單加EGF的陽性對照和高劑量TGF-a陰性對照,均設3復孔,總反應體積為lmL。

    3.置37~C 5%C02溫箱中培養72h。用PBS洗3次,每孔加入5%三氯醋酸lmL沉淀DNA,再用甲醇洗孔1次,離心去甲醇溶液。加入lmLlmol/LNaOH,溶解細胞。將各孔細胞吸人閃爍液瓶中,在p-計數儀上測定各孔的cpm。根據標準曲線計算待測樣品中的TGF-a含量(活性)。www.shhdbio.com

 
 
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