貨號(hào)：C6101
規(guī)格：5000U
產(chǎn)品組成及保存條件：
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編號(hào) |
規(guī)格 |
儲(chǔ)存條件 |
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C6101 |
5000U |
-20°C，保質(zhì)期24個(gè)月 |
濃度：40000U/
ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
RNase Inhibitor可與RNase 非共價(jià)結(jié)合，開(kāi)成1:1的復(fù)合物，可以特異性抑制RNase A、RNase B、RNase C和人胎盤(pán)RNase，不抑制T1和RNase H活性，具有廣譜的RNase抑制活性。對(duì)RNase1、RNaseT1、S1核酸酶，RNase H或來(lái)源于曲霉屬的RNase無(wú)抑制作用。兼容性好；不影響M-MLV或AMV Reverse Transciptase、Taq DNA Polymerase、T3、T7或SP6 RNA Polymerase 活性，在較寬的pH范圍內(nèi)（pH 5-8)均可發(fā)揮作用。尿素及巰基類(lèi)試劑可以解離本品與RNase 形成的復(fù)合物，使RNase復(fù)活而RNase Inhibitor 不可逆失活，因此反應(yīng)體系中應(yīng)避免尿素及巰基類(lèi)試劑存在。
RNase抑制劑的分子量為50kDa,通過(guò)非共價(jià)鍵以1:1的比例與RNase結(jié)合而抑制其酶活，結(jié)果常數(shù)大于1014
產(chǎn)品應(yīng)用：
1、RT-PCR；
2、cDNA 合成反應(yīng)，提高多聚核糖體的產(chǎn)量和活性；
3、體外無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄或翻譯（Cell-free in
vitro trans
4、酶催化的RNA標(biāo)記反應(yīng)；
5、對(duì)RNA的完整性要求高的其他應(yīng)用。
產(chǎn)品來(lái)源：
來(lái)自豬的RNase抑制基因在大腸桿菌中表達(dá)和多步純化精制而成。
活性定義：
一個(gè)活性單位（U）定義為：抑制5ng RNase A 的50%活性所需的RNase Inhibitor量。
活性測(cè)定是通過(guò)抑制RNaseA對(duì)胞嘧啶 2′,3′ -環(huán)單磷酸鹽的水解來(lái)測(cè)定的。
酶儲(chǔ)存液：
20mM HEPES-KOH，50mM KCI,8mM DTT,50%Glycerol, PH7.6@25℃
保存條件：
-20°C，有效期24個(gè)月。
使用說(shuō)明：
使用RNase
Inhibitor避免RNase污染方法：加入抑制劑，使反應(yīng)終濃度達(dá)到1U/ul。再加入組分過(guò)程中，RNase抑制劑應(yīng)在其他可能是RNase污染源的組分（如酶、微量質(zhì)粒）之前加入。
注意事項(xiàng)：
1、RNase Inhibitor 是一種50kDa的蛋白質(zhì)，在變性條件下會(huì)失活。
2、RNase Inhibitor 應(yīng)在低于50℃的溫度下使用。
3、本品抑制RNase活性的pH值范圍較廣，在pH7~8時(shí)表現(xiàn)zui大活性。
4、避免起泡劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止本品失活。
附：RNA酶抑制劑各個(gè)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)量推薦：
1.RT PCR：推薦反應(yīng)體系按照1U／ul；
2.cDNA合成：推薦反應(yīng)體系按照0.5~1U／ul；
3.體外無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄：推薦反應(yīng)體系按照15~20U／ul；
4.SP6或T7RNA聚合酶的體外轉(zhuǎn)錄：推薦反應(yīng)體系按照1U／ul；
5.多核糖體分離：推薦反應(yīng)體系按照1U／ul；
6.體外翻譯：推薦反應(yīng)體系按照1U／ul；
7.酶催化的RNA標(biāo)記反應(yīng)：推薦反應(yīng)體系按照1U／ul；
上述所述實(shí)驗(yàn)給出的是推薦反應(yīng)用量，具體的RNA酶抑制劑在各個(gè)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)中的zui佳用量需要具體實(shí)驗(yàn)具體分析，因?yàn)?/span>RNA酶抑制劑的具體定量與不同實(shí)驗(yàn)反應(yīng)中的RNase含量和反應(yīng)Buffer都有關(guān)聯(lián)，所以，實(shí)驗(yàn)反應(yīng)中的zui佳NRA酶抑制劑的用量建議還是要做一下預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。
