一步法單菌落質粒DNA提取試劑盒說明書

產品編號：BTN70804

規格：50T

產品及特點：

本產品是在百奧萊博一步式質粒DNA提取試劑盒（BTN70301）基礎上開發的、能夠從單個菌落快速提取質粒DNA 的產品。它之所以能夠從單個菌落中提取到可以用常規電泳方法檢測得到的質粒DNA 是由于一步式細菌裂解技術能夠使細菌釋放出其幾乎所有的質粒DNA。本產品具有下列特點：

1. 不需過夜培養細菌就可以提取質粒DNA，能為研究人員節約一天的寶貴時間。

2. 快速，整個過程只需要不到十分鐘（對一個樣品而言）。

3. 一步式裂解細菌，不使用強堿溶液，對DNA 損傷小。

4. 得到的質粒DNA 足夠1-2 次電泳或酶切實驗，足夠多次PCR、測序和細菌轉化實驗。

5. 適用于高拷貝、中拷貝和低拷貝的質粒。

格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存（溶液A 需要4℃保存），有效期一年。

使用方法：

1. 用吸頭挑取一個直徑在2 mm 以上的菌落到100 μL 一步法單菌落質粒DNA提取試劑盒溶液A 中（溶液A 用前搖勻），充分吹打或振蕩裂解直到裂解液變澄清。

2. 直接將裂解液全部轉移到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘使質粒DNA 與膜結合。室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

3. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。注意: 如果通用預洗液放置在低溫產生了沉淀，用前需要加熱到60℃左右使之融化，混勻后再用。

4. 再在離心吸附柱中加入0.3 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此步預洗zui好別省略，否則DNA 純度不高。

5. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

6. 再在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第二次洗滌。

7. 再在離心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第三次洗滌，如果不洗滌三次，zui后得到的質粒DNA 的OD260 和280 的比值達不到1.8。

8. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續的電泳上樣（DNA 沉不到加樣孔里去）和酶反應。

9. 將離心柱置于一個新的1.5 mL 自備塑料離心管中，加入30-100 μL DNA洗脫液2.0，室溫放置2 分鐘。如果將DNA 洗脫液2.0 預熱到65-80℃，則效果更好。

10. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，離心管底部溶液即為質粒DNA，可以直接用于后續實驗或放冰箱長期保存。