柱式分枝桿菌DNA提取試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN70703

規(guī)格：50T

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

分枝桿菌屬（Mycobacterium）是為古老的細(xì)菌，與人類的疾病相關(guān)的就有25種以上，包括引起結(jié)核病的結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteria tubercμLosis）。近年來由于多重耐藥性分枝桿菌的出現(xiàn)，分枝桿菌再次成為人們關(guān)心的細(xì)菌。PCR快速診斷是目前檢測分枝桿菌的主流方法，但由于此類細(xì)菌具有十分獨(dú)特的堅硬的細(xì)胞壁，快速提取其基因組DNA一直是十分棘手的技術(shù)問題。本產(chǎn)品就是為解決這一問題而開發(fā)，具有下列特點(diǎn)：

1. 操作簡單，客戶不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

2. PCR檢測靈敏度一般在10-100CFU/mL樣品。

3. 既可以使用培養(yǎng)的細(xì)菌，也可以使用痰液、精液、血液、腦脊液等樣品。

4. 價廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價格。

5. 安全，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸和保存，但化痰液和溶液B需要低溫運(yùn)輸、4℃保存，有效期一年。

自備試劑：

TE緩沖液，氯fang。

使用方法：

注意：文獻(xiàn)報道部分分枝桿菌在DNA提取過程中還有形成菌落的能力，所以任何丟棄的溶液都必須按有傳染性的污染物品對待，并嚴(yán)格按有關(guān)部門要求進(jìn)行消毒處理。

一: 培養(yǎng)的分枝桿菌樣品的預(yù)處理

1. 刮取培養(yǎng)的分枝桿菌到0.5 mL 自備TE緩沖液中。

2. 80℃放置20分鐘以殺滅細(xì)菌。

3. 3000 g室溫離心15分鐘，棄上清。

4. 細(xì)菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入細(xì)菌基因組DNA提取步驟。

二: 含分枝桿菌的痰液樣品的預(yù)處理

1. 將需要處理的痰液樣品加入到干凈的10 mL或15 mL塑料離心管中。

2. 加入等體積的化痰液，充分混合均勻后室溫放置15-30分鐘。如果痰很濃，可以延長保溫時間。

3. 3000 g室溫離心15分鐘，棄上清。

4. 細(xì)菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入細(xì)菌基因組DNA提取步驟。

三: 含分枝桿菌的血液樣品的預(yù)處理

1. 用自備紅細(xì)胞裂解液對血液進(jìn)行紅細(xì)胞裂解處理，具體操作見百奧萊博紅細(xì)胞裂解液（BTN60403）使用手冊。

2. 將得到的白細(xì)胞沉淀-20℃或更低溫度放置10分鐘。

3. 迅速將得到的白細(xì)胞沉淀100℃加熱10分鐘。

4. 上述處理將使大部分白細(xì)胞破裂，加入自備的TE 或PBS緩沖液,直到離心管體積的一半位置。此步使白細(xì)胞的DNA進(jìn)入緩沖液中。

5. 離心5-10分鐘沉淀細(xì)菌，離心速度取決于離心管的大小。如果樣品在1.5 mL離心管，則可以12000-15000 g室溫離心。如果樣品在10-15 mL離心管，則3000-5000 g室溫離心。

6. 吸棄上清(含白細(xì)胞DNA)后所得細(xì)菌沉淀可以放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入細(xì)菌基因組DNA提取步驟。

四: 細(xì)菌基因組DNA的提取

1. 將150 μL 65℃預(yù)熱過的溶液A加到有細(xì)菌沉淀的離心管中，充分震蕩混勻。

2. 將細(xì)菌和溶液A的混合物轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5 mL塑料螺旋蓋離心管中。強(qiáng)烈建議不要使用壓蓋式塑料離心管，否則后面處理過程中溶液容易漏出。

3. 加入300 μL 溶液B和300 μL 自備氯fang，充分震蕩混勻。

4. -20℃放置直到液體凝固，一般需要20-60分鐘。過夜放置也可。

5. 放室溫融化后振蕩半分鐘。

6. 12000-15000 g室溫離心3-5分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

7. 12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。

8. 加入0.5 mL通用洗柱液 12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9. 重復(fù)第8步的洗滌過程一次。

10. 短暫離心半分鐘。此步不要省略，否則殘留的洗柱液（含乙醇）將會影響DNA電泳、酶切和PCR等反應(yīng)。

11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的離心管中，加入30-100μL DNA洗脫液2.0，12000-15000 g室溫離心半分鐘，所得溶液即基因組DNA。

12. 直接取5-10 μL電泳檢測DNA，其余放冰箱備用或用于后續(xù)反應(yīng)。