糞便DNA提取試劑盒說明書
產品編號：BTN70601
規格：30T/100T
產品及特點：
動物糞便中夾雜著許多脫落的腸道上皮細胞和腸道病原菌，因此通過PCR 對糞便DNA 進行分析是診斷腸道遺傳病(如大腸癌等)和傳染病的重要材料, 具有比常規的結腸鏡檢測和大便隱血實驗更高的特異性和靈敏度。通過PCR 對糞便DNA 進行分析還可以對瀕危物種進行遺傳分析。但糞便中成分復雜多變，常含有對PCR等后續反應有大的抑制作用的不明成分，所以從糞便中提取高純度的DNA 十分棘手。
本產品是專門用于從各種動物糞便中提取高質量的DNA的試劑。
1. DNA 純凈，OD260/280 一般都在1.8以上，得到的DNA樣品原液或稀釋液可以直接用于PCR 等后續反應。
2. 每次微量提取可以處理100-300mg 左右的樣品，能得到5μg左右DNA，片段長度在30Kb左右。
3. 可以同時提取到腸道上皮細胞和腸道病原菌的DNA。
4. 操作過程簡單快速，只需要30 分鐘。
5. 擴容性好，既可以在1.5 mL 離心管中微量提取，也可以在50 mL 離心管中進行大規模制備。
6. 試劑無害, 環保。
規格及成分：
|
成分 |
30T |
100T |
|
溶液A |
15ml |
50ml |
|
溶液B |
15ml |
50ml |
|
說明書 |
1份 |
1份 |
注：溶液A 和溶液B 均為無色液體，溶液A 4℃保存時會產生沉淀，用前需要65℃溶化并混勻。
保存條件：
常溫運輸及保存，有效期一年。
自備試劑：
氯fang、無水乙醇、75%乙醇。
使用方法：
下面的操作步驟為1.5mL 塑料離心管中進行的微量提取。如果樣品用量增加，需要使用大的離心管，各提取試劑的用量也需要按比例增加。
1. 65℃預熱溶液A，待其沉淀溶化后，充分混勻，然后取0.5 mL 加入到1.5 mL塑料離心管中并放置于65℃待用。zui好使用螺旋蓋離心管。
2. 取0.1-0.3 g 的新鮮或冷凍的動物糞便，加入到含預熱溶液A 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10 分鐘。注意:一定要讓管底的樣品充分震蕩起來。
3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5 分鐘。
4. 13000-15000 g 室溫離心3 分鐘，將上清轉移到一新的1.5 mL 塑料離心管中。
5. 在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30 秒使之充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5 分鐘。
7. 13000-15000 g 室溫離心3 分鐘，轉移上清到新的1.5 mL 塑料離心管中。
8. 加入0.2 mL 的氯fang(自備)，震蕩器上充分振蕩30 秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。
9. 13000-15000 g 室溫離心3 分鐘，小心轉移上清到新的1.5 mL 塑料離心管中。
10. 重復第8 步和第9 步一次。
11. 將上清轉移到新的1.5 mL 離心管時，不要超過0.5 mL，否則沒有空間加兩倍體積的乙醇。如果有多余的可以棄之不用。
12. 加入2 倍體積的乙醇(自備)，上下顛倒30 秒混勻，15000 g 離心5-10 分鐘，棄上清，管底將有微小DNA 沉淀。注意：zui好不要用異丙醇代替乙醇，否則不容易去除帶色素的雜質。
13. 加入1mL 75%乙醇（自備），震蕩數秒，13000-15000 g 室溫離心3 分鐘，棄上清。
14. 重復上步清洗一次。注意：75%乙醇洗兩次有助于去除PCR 抑制物。
15. 短暫離心，吸棄殘留的75%乙醇（約50μL），室溫晾干。注意：一定要去除殘留的75%乙醇，否則會影響后續反應和電泳上樣（樣品會飄走）。
16. 加入30 μL TE 緩沖液溶解沉淀。注意：不知道樣品DNA 產率前zui好不要加過多TE。如果DNA 濃度高，可以再加TE 稀釋。如果DNA 有顏色,可以使用柱式腐殖酸清除劑（BTN60801）純化一次。
17. DNA 即可用于電泳、酶切和PCR 等反應。zui好用原液和稀釋液對照做PCR，
zui好按PCR 終體積的1/10 加入隨贈的PCR 抑制物清除劑（BTN60804）。
