綠如藍核酸染料(UV型)說明書

產品編號：BTN70303

規格：1.5mL

產品及特點：

目前zui常見的替代EB 的核酸染料SYBR Green I（屬于花氰類染料）雖然毒性比EB 低、靈敏度比EB 高，但由于其化學穩定性差（怕光、怕水、怕熱），實驗結果的重復性往往不盡人意；此外，SYBR Green I 在電泳過程中能在DNA 分子間移位，很容易使DNA 條帶模糊和扭曲，電泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在實際應用中依然不能有效替代EB。本產品是同時具有EB 穩定性和SYBR Green I 低毒性的新性核酸染料，其特點如下：

1. 低毒。其主要成分未發現對人體有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保護使用者的健康和保護日益惡化的環境。

2. 靈敏。檢測靈敏度跟EB 相當，能滿足常規核酸電泳實驗要求。

3. 穩定。對光、水和熱的穩定性跟EB 相當，可加入瓊脂糖凝膠中反復熔化。

4. 無分子間位移現象。不會出現SYBR 染料常見的條帶模糊和扭曲現象。

5. 使用方法多樣。既可以加入熔化的膠中，也可以電泳后染色，還可用于PAGE。

6. 跟各種常用的核酸電泳緩沖液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2 和TBE 中背景zui低。

7. 觀察時不需要任何額外的儀器設備或UV 光源，可以使用現成的觀察EB 的300nm UV。

8. 可用于 RNA 染色(也呈綠色)。

9. DNA 或RNA 濃度較高時還可以直接在日光下觀察（需要將膠放在黑色背景下）。由于避免了UV 對DNA 的傷害，尤其適用于膠回收實驗。

規格及成分：

 

保存條件：

常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑：

電泳緩沖液和瓊脂糖凝膠。

使用方法：

注意:雖然本產品的主要成分未發現對人體有致癌性、未被列入有毒有害品，但操作時zui好還是戴上塑料手套。

使用方法之一：電泳中染色DNA （RNA 的染色跟DNA 完全一樣）。

本方法是將綠如藍核酸染料直接加入溶化的凝膠中使用，只適用于瓊脂糖凝膠電泳，不適用于PAGE。

1. 將綠如藍核酸染料直接加入到融化的瓊脂糖凝膠中，每100mL凝膠加3-10μL綠如藍核酸染料，混合均勻后倒膠。瓊脂糖凝膠中不能含任何其他染料（如EB 和SYBR Green I，否則會相互干擾）。在100mL 瓊脂糖凝膠中加入綠如藍核酸染料的量不要超過10 μL，否則背景將很強。注意：一定要保證瓊脂糖徹底熔化，尤其是在一次熔化膠的時候，否則未熔化的小顆粒將產生跟染料相同的熒光。

2. 將 DNA 樣品與DNA 上樣液按比例混合后上樣。注意：一定要使用不含SDS 等去污劑的上樣液，否則SDS 會跟染料結合，大地降低靈敏度。

3. 上樣后電泳，電泳參數同常規的電泳。如果使用百奧萊博五分鐘核酸電泳液SuperBuffer-2，需要較高電壓，詳見該產品說明書。

4. 電泳結束后在300 nm 左右 的UV 下觀察。注意：不要使用波長為260 nm 或360 nm 的UV，否則檢測靈敏度會降低。如果DNA 或RNA 濃度較高，還可以直接在日光下直接觀察（需要將膠放在黑色背景下），避免UV 對DNA 的傷害，尤其適用于膠回收實驗。

注：顯色結果：在紫外下，DNA 濃度非常高的時候是白色，濃度低的時候是綠色的，單鏈核酸有時是紅色的。

5. 用配置了520-550 nm 濾光片（一般呈黃色或深黃色）的相機拍照。注意：不要使用與EB 兼容的紅色濾光片（它能阻擋520-550 nm 的光）。如果能再加上能濾去UV 的濾光片，效果會更好。

6. 后續 Southern、轉膜或DNA 膠回收實驗按常規操作進行。

使用方法之二：電泳后染色DNA

本方法是在電泳后對DNA 進行染色，適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE。但該方法需要單獨的染色處理，染料用量較大，不推薦用于瓊脂糖凝膠的染色。

1. 按照常規方法進行電泳。

2. 用去離子水將綠如藍核酸染料稀釋500 倍后（100 mL 水需要加0.2 mL 綠如藍核酸染料），將凝膠放入，室溫下搖晃染色30 分鐘（對瓊脂糖凝膠）或15 分鐘（對PAGE）。

3. 用水脫色 10-30 分鐘，具體時間需根據背景強弱決定，其余同方法一。

注意：電泳后染色液可以反復使用次數。

疑難解答：

Q：本產品可否用于RNA 染色？

A： 可以，不論RNA 是在甲醛變性膠中電泳，還是在普通的SuperBuffer-2、TBE 或TAE 膠中電泳，RNA 染色后在300nm 下都跟DNA一樣呈綠色。

Q：本產品是否可以加入上樣液中進行染色？

A：不行，本產品只能直接加入凝膠中進行染色或電泳后再染色。

Q：為何前端（靠近正）的DNA 條帶很淡或根本看不見？

A：跟EB 一樣，電泳時綠如藍核酸染料朝負方向移動，當前端的DNA（zui小片段）進入沒有綠如藍核酸染料的區域時，已經結合的染料分子會逐漸從DNA 分子上脫落，所以條帶會變淡或根本看不見。解決辦法之一是縮短電泳時間或電泳后再染色；之二是在每100 mL 電泳緩沖液中補加3-5μL 染料。

Q：本產品在哪種緩沖液中效果zui好？

A：綠如藍核酸染料在不同緩沖液中背景熒光強度不同，從弱到強的順序是：

SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景較強的緩沖液體中，可以適當降低染料的用量，比如100mL 膠中加3-5 μL。zui佳濃度需要稍做摸索。

Q: 為何電泳后前面部分（靠近正）的膠呈白色，后面的膠呈黑色？

A: 綠如藍核酸染料帶正電，電泳時往上走，膠的黑色部分是染料上移后留下的無染料膠。

本產品在TAE 中背景zui強，可參考上個問題答案更換電泳液以降低背景值。

Q：用SYBR 染色的DNA 在電泳時為何容易發生條帶模糊和扭曲現象？

A：SYBR 染料一般與DNA 的小溝結合，但在常規電泳條件下該結合并不牢固，染料分子可以在標記的和未標記的DNA 分子之間轉移，使DNA 分子的泳動速度時快（無染料結合時）時慢（有染料結合時），發生條帶模糊和扭曲現象。嵌入型染料（如EB和本產品）與DNA 結合牢固，則無此現象。

Q：核酸染料是否都有毒性？

A：核酸染料對動物和人的毒性由多方面決定。

一是染料的膜通透性，EB 被歸類為強誘變劑是由于其分子量較小，容易進入細胞內。而EB 二聚體Ethidium Homodimer（EthD）嵌入DNA 的能力比EB 強上千倍，但毒性很小，就是由于其分子比EB大，不能透過細胞膜，所以毒性反而更低。SYBR 系列染料雖然低毒，但由于一般都溶于DMSO（因為容易水解，不能使用水溶液做溶劑）中，所以如果濺到皮膚表面，更容易進入皮膚。

二是染料是否容易被人體降解。比如EB 在體外就很難降解，一旦進入體內能在人體內殘留的時間可能比較長，增加了毒性；而SYBR Green I等染料（也能以嵌入方式與DNA 結合）由于不穩定，比較容易自然降解，所以毒性自然較低。

三是降解產物是否有毒性，比如用很多方法（如強堿法）降解EB 得到的產物有的比EB 毒性更大，而有的染料降解產物毒性卻低很多，甚至。

四是染料進入細胞核以后是否能跟DNA 結合，很多實驗結果顯示即使EB 染料也很難嵌入型到染色體中，因為染色體中的DNA 已經緊密地與各種組蛋白結合。

五是細胞修復突變的能力，正常人體都有很強的修復突變的能力，如修復日光中UV 誘導的DNA 突變。總之，一種DNA 染料的毒性強弱是多種因素綜合的結果。