柱式酵母質(zhì)粒DNA提取試劑盒說明書

產(chǎn)品編號(hào)：BTN70202

規(guī)格：50T

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是專門用于提取酵母質(zhì)粒DNA 的產(chǎn)品(不適用于酵母dsRNA 質(zhì)粒)。本產(chǎn)品根據(jù)酵母細(xì)胞壁十分堅(jiān)硬的特點(diǎn)，在細(xì)菌質(zhì)粒堿裂解法的基礎(chǔ)上，增加了裂解酵母細(xì)胞壁的預(yù)處理步驟，可在1 小時(shí)左右得到可以用于PCR 或轉(zhuǎn)化酵母質(zhì)粒DNA。

1. 快速，整個(gè)過程只需要一個(gè)小時(shí)左右，可同時(shí)處理多個(gè)樣品。

2. 得到的酵母質(zhì)粒DNA 純度高，可直接用于轉(zhuǎn)化和PCR 等實(shí)驗(yàn)。

3. 可以從平板上的菌斑或液體培養(yǎng)的酵母中抽提質(zhì)粒DNA。

4. 安全，不需使用玻璃珠、酚、氯fang等試劑。

5. 每5-10 mL 酵母培養(yǎng)液一般可以提取到1μg左右的高拷貝酵母質(zhì)粒DNA。

6. 即開即用，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸及保存（RNase A 溶液4℃保存），有效期一年。

自備試劑：

無菌水。

使用方法：

1. 將5-10 mL 酵母過夜液體培養(yǎng)物分多次轉(zhuǎn)移到1.5 mL 塑料離心管中。每轉(zhuǎn)移一次后，需要12000-15000×g 室溫離心1分鐘，然后吸棄液體培養(yǎng)基。注意：不要使用培養(yǎng)時(shí)間超過16 小時(shí)的酵母液體培養(yǎng)物，否則質(zhì)粒DNA 產(chǎn)量偏低；也不要使用超過10 mL 的酵母液體培養(yǎng)物，否則破壁不充分，降低質(zhì)粒DNA 產(chǎn)量。

2. 加入1 mL 自備的無菌水，充分震蕩混勻，12000-15000×g 室溫離心1分鐘，吸棄上清。

3. 加入600 μL 溶液A，充分震蕩細(xì)胞沉淀重懸，95℃保溫10分鐘。

4. 12000-15000×g 室溫離心1分鐘，棄上清液。

5. 加入250 μL 含破壁酶的溶液B (配制方法是將本試劑盒提供的50mg 粉末狀的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到裝有13 mL溶液B的塑料瓶中，輕柔搖晃混勻后使用。未用完的部分需要分裝成小份然后放-20℃保存，否則破壁酶很容易失去活性)，吹打混勻。

6. 37℃保溫30分鐘，延長保溫時(shí)間到60分鐘有利于細(xì)胞壁的裂解。注意：放置較長時(shí)間后，溶液B 中的裂壁酶會(huì)逐漸失活，額外再加入一些裂壁酶（如蝸牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme 等，總濃度為1 mg/mL）可以大提高產(chǎn)量。

7. 將離心管放冰浴冷卻后，加入250 μL 溶液C，輕輕顛倒混勻直至裂解液變得澄清，然后室溫放置5-10分鐘。注意：不要?jiǎng)×艺鹗帲駝t基因組DNA 將斷裂并污染質(zhì)粒DNA。

8. 加入350 μL 溶液D，輕輕顛倒混勻幾次，管內(nèi)將出現(xiàn)白色沉淀物，然后冰浴放置10-30分鐘（如果質(zhì)粒較長，zui好放置30分鐘）。

9. 12000-15000×g 室溫離心6-10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。

注意：不要將漂浮在液面的沉淀物（如果有的話）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。上清液可以分多次轉(zhuǎn)移。

10. 室溫下放置至少2分鐘以讓質(zhì)粒DNA 充分結(jié)合到離心吸附柱上。

11.12000-15000×g 室溫離心1分鐘，棄穿透液。

12. 將 500 μL 通用洗柱液加入離心吸附柱中，12000-15000×g 室溫離心1分鐘，棄穿透液。

13. 重復(fù)上步操作一次。

14.12000-15000×g 室溫離心1分鐘去除離心吸附柱中殘留液體。不要此步省略，否則殘留洗液將影響后續(xù)的電泳、PCR 和轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

15. 將離心吸附柱套在一干凈的1.5 mL 塑料離心管中，加入30-100 μL DNA 洗脫液2.0（加入的量取決于預(yù)期的DNA 濃度）至離心吸附柱的膜的中央。

16. 室溫下放置至少2分鐘。

17.12000-15000×g 室溫離心1分鐘以洗脫DNA。

18. 如有必要，可以再加入適量DNA 洗脫液2.0洗出殘留的DNA。第二次洗脫得到的DNA 的產(chǎn)量約為一次的30-50%。不要將已經(jīng)洗脫的、含DNA 的溶液再加上去。