柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒說明書

產品編號：BTN60807

規格：50T

產品及特點：

本產品是整合我們公司柱式質粒DNA提取和菌體內毒素清除劑兩產品而成。菌體內毒素清除劑是我們公司推出的產品，在質粒提取前就把細胞壁上的內毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取DNA+內毒素混合物，再從中純化質粒DNA的弊端。用本產品提取的質粒DNA，內毒素的污染濃度低，適合于轉染等對內毒素的污染敏感的實驗。

1. 操作簡單，只在經典的柱式質粒DNA提取前，增加菌體內毒素清除一步。

2. 去內毒素效guo好，處理一次可以去除99%以上的內毒素。

3. 質粒丟失少，產率只比柱式質粒DNA提取低5-10%，效guo好于先提質粒DNA，再用液相內毒素清除劑處理的方法。

4. DNA可以直接用于轉染等實驗。

規格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）需要低溫運輸和保存。

自備試劑：

TE緩沖液（pH 8.0）或無菌水。

使用方法：

一: 用菌體內毒素清除劑清除E.coli細胞壁上的內毒素。

1. 收集1.5-3 mL E.coli飽和菌液，12,000 rpm離心1分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。

2. 加入1 mL本產品溫和混勻后10,000-12,000 rpm離心1分鐘，棄上清（含內毒素）。

3. 再重復上述操作3-4次，得到的菌體可以直接進入后續的質粒DNA提取步驟。

二：從無內毒素的E.coli中提取質粒DNA

1. 用1.5 mL離心管收集1-4 mL 過夜培養飽和菌液，12,000 rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

2. 加入250 μL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸。

3. 加入250 μL溶液B（如果有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復顛倒混勻4-6次，看到溶液變粘即可。千萬不要劇烈振蕩。

4. 加入350 μL溶液C，反復顛倒混勻4-6次，可見白色沉淀物產生，然后冰上靜止2-5分鐘。注意：不要超過5分鐘。

5. 室溫12,000 rpm離心10分鐘，將上清液轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

6. 12,000 rpm離心1分鐘，質粒DNA吸附到膜上，棄收集管中的廢液。

7. 加入500 μL的通用洗柱液，12,000 rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。注意：我們公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液組成，NaCl在其中的溶解度較低，放置一段時間后可能會產生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前zui好加熱使之溶解并混勻后使用。

8. 重復上步操作1次。

9. 12,000 rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續的電泳上樣（DNA沉不到加樣孔里去）和酶反應。

10. 將離心柱置于新的1.5 mL離心管（自備）中，加入50 μL DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。

11. 12,000 rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質粒DNA。

12. 由于天我們公司的吸附柱結合DNA能力較強，需要再加入50 μL DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，重復上步操作，往往還能洗脫下很多質粒DNA（相當于一次洗脫的20-30%）。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脫液來進行第二次洗脫。

13. 將兩次洗脫收集到的質粒DNA匯集即可立即使用或放冰箱保存。