柱式細(xì)菌DNA提取試劑盒說明書

產(chǎn)品編號(hào)：BTN60802

規(guī)格：50T(A)/50T(B)

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是在細(xì)菌DNA提取試劑盒礎(chǔ)上開發(fā)的柱式升級(jí)產(chǎn)品，可以用于大多數(shù)革氏陽性和陰性細(xì)菌基因組DNA的快速提取。

1. 操作簡單，整個(gè)過程不到20分鐘。

2. 產(chǎn)率一般在5-20μg/mL過液培養(yǎng)的飽和菌液（10⁸-10⁹個(gè)細(xì)胞）。

3. OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)。

4. DNA片段長度一般在40-50 Kb左右。

5. 每次提取可以處理0.1-1.5mL的細(xì)菌，也可以使用菌落。

6. 價(jià)廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價(jià)格。

7. 安全，本試劑盒對(duì)人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。

8. 本產(chǎn)品分A型（無溶菌酶，適用于革氏陰性細(xì)菌）和B型（含溶菌酶，適用于革氏陽性細(xì)菌）。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸及保存（溶菌酶需要-20℃保存），有效期一年。

自備試劑：

氯fang、自備無菌水。

使用方法：

注意：溶液A和溶液B容易產(chǎn)生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。

一: 對(duì)革氏陰性細(xì)菌樣品，只需用A型

1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，12000rpm室溫離心1min沉淀細(xì)菌，棄上清。

2. 加入300μL預(yù)熱的溶液A到細(xì)菌沉淀中，充分吹打均勻。

3. 再加入150μL預(yù)熱的溶液B到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時(shí)溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。由于溶液B比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150μL約等于150-160 mg。也可以將1mL槍頭剪去一截再吸取。

4. 65℃放置3-5分鐘。如果室溫放置，DNA產(chǎn)量會(huì)降低10-20%。

5. 加入200 μL自備氯fang，震蕩混勻10-30秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。

6. 12,000 rpm室溫離心2分鐘。此時(shí)上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。

7. 加入1.5倍體積(約0.7mL)的溶液C，顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。

8. 12,000 rpm室溫離心1分鐘，DNA將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。

9. 將0.5mL通用洗柱液加入離心柱中，12,000 rpm室溫離心1分鐘，棄穿透液。

10. 重復(fù)上步操作一次。

11. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的1.5mL離心管中。

12. 加50-100μL通用洗脫液，室溫放置3-5分鐘。

13. 12,000 rpm室溫離心1分鐘即得DNA溶液。

14. 由于本產(chǎn)品使用的離心吸附柱吸附DNA的能力較強(qiáng)，可以重復(fù)上步操作一次以便得到更多的DNA。

15. 直接取5-10μL電泳檢測(cè)DNA，其余放冰箱備用。

二: 對(duì)革氏陽性細(xì)菌樣品，需用B型（含溶菌酶）

1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的革氏陽性細(xì)菌12,000 rpm室溫離心1分鐘后, 重懸于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL無菌水+600 mg溶菌酶，配制后zui好分裝成小管并放-20℃長期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻5-10次后放37℃保溫至少30分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時(shí)間，自己摸索)。

2. 12,000 rpm室溫離心10分鐘，小心棄上清。

3. 后續(xù)處理接上面的革氏陰性細(xì)菌提取步驟中的第2步。

三: 其他注意事項(xiàng)

1. 可以直接使用細(xì)菌菌落提取DNA，操作時(shí)直接將細(xì)菌菌落挑入到溶液A中，后續(xù)操作同上。

2. 從單個(gè)菌落中提取到的DNA較少，所以只用30μL通用洗脫液洗脫。

使用效果：

 

圖注:用本產(chǎn)品提取1.0mL過夜培養(yǎng)的E.coli Tg1細(xì)菌，DNAzui后溶于100μL TE中，取20μL上樣。M表示全長的λDNA,其余均為提取的樣品DNA。