柱式腐殖酸清除劑說明書

產(chǎn)品編號：BTN60801

規(guī)格：30T/100T

產(chǎn)品及特點：

用大多數(shù)文獻報道的方法從土壤或湖海沉積物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用百奧萊博的土壤DNA提取試劑盒從泥碳（腐殖酸含量超過50%）等腐殖酸豐富的土壤樣品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它們往往對PCR等后續(xù)反應有大的抑制作用。本產(chǎn)品專門用于從土壤DNA樣品中清除腐殖酸污染。

1.去污染效guo好，能使腐殖酸的濃度降低10倍以上。

2.DNA回收率高，一般都在80%以上。

3.操作過程簡單快速，只需要10分鐘。

4.擴容性好，可小規(guī)模操作，也可以大規(guī)模操作。

5.處理后的樣品原液或稍微稀釋后即可用于PCR。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：

1.將0.3 mL專用上柱液與50 μL或50 μL 以下的含腐殖酸的DNA溶液輕柔混勻。如果DNA溶液體積超過50 μL, 專用上柱液的體積需按1:6 (DNA溶液:專用上柱液) 的比例相應增加。不要劇烈震蕩，否則DNA容易斷裂。

2. 將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，放于離心管架上，靜置3-5分鐘，12000-15000 g離心1分鐘并倒掉收集管中的液體。若一次加不完，可分兩次加入并離心。

3. 加入0.5 mL通用洗柱液于離心柱中，12000-15000 g離心1分鐘，倒棄收集管中的廢液。

4. 重復第3步操作1次。

5. 12000-15000 g離心1分鐘以去除離心柱中的殘留液體。

6. 將離心柱置于一新的干凈的離心管（自備）中，加入50 μL通用洗脫液，靜置3-5分鐘，12000-15000 g離心1分鐘。

7. 離心管底部所得溶液即為純化的DNA溶液，可立即用于后續(xù)實驗或者放冰箱長期保存。

使用效果：

圖注：從泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本產(chǎn)品處理前(B)和處理后(A)的顏色對比。處理前OD340為4.0（4為所用分光光度計的上限，實際讀數(shù)可能遠高于4），處理后降低到0.3。處理前的原液、10倍和100倍稀釋液均無PCR擴增，而處理后均可以擴增。

疑難解答：

Q: 如何判斷提取的DNA沒有腐植酸污染？

A：方法一是目測法，即看得到的溶液是否無色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說明可能是少量殘留的未除盡的腐植酸。方法二是檢測zui大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR擴增。

Q: 腐殖酸的zui大吸收波長是多少？

A：腐植酸（humic acid）是一大類呈棕黑色或黑色的物質(zhì),其結(jié)構(gòu)千差萬別，土壤中腐殖酸的組成和特點隨土壤不同而不同，所以其zui大吸收波長也各不相同。有的土壤的腐殖酸的zui大吸收波長在260 nm（見Appl. Environ. Microbiol., 63：4993, 1997），有的則在340 nm，所以用特定的波長測定OD值時波長的選定要根據(jù)土壤而決定。Sigma, Fluka等公司出售的腐植酸產(chǎn)品成分一般比較簡單，其zui大吸收波長不能推廣到成分更為復雜的土壤腐殖酸樣品。

Q: 是否腐植酸都會抑制后續(xù)的DNA反應？

A：否，因為腐植酸是一大類物質(zhì)的統(tǒng)稱，他們的結(jié)構(gòu)和特性各不相同，所以是否對后續(xù)反應有影響zui好通過實驗來驗證。如果用提取的DNA溶液原液進行反應而反應沒發(fā)生，而對照樣品（已知的不含污染的DNA）能夠發(fā)生，說明可能有抑制作用。

Q：除本方法外，還有什么有效方法去除DNA樣品中的腐植酸？

A：可以先電泳，然后用片段膠回收試劑Magic Gel DNABACK（BTN60706）純化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接擴增。

Q：本產(chǎn)品與柱式DNABACK有何區(qū)別？

A：本產(chǎn)品由柱式DNABACK改進而來，主要區(qū)別一是使用了不同的上柱液，減少了硅膠膜對DNA的非特異吸附，更適用于微量DNA樣品；二是上柱液中含有腐殖酸去除試劑，適合于土壤DNA樣品。

Q：在用土壤DNA進行細菌專一性PCR時，為何沒加DNA模版的陰性對照有擴增產(chǎn)物出現(xiàn)？

A：這是由于使用的Taq DNA聚合酶一般從E.coli表達菌株中提取，提取過程中污染了E.coli的基因組DNA，而使用的廣譜細菌專一性引物可以識別所有細菌DNA基因組DNA模版，所以會產(chǎn)生擴增。建議使用高質(zhì)量的Taq DNA聚合酶。