細菌DNA提取試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN60707

規(guī)格：50T/250T

產(chǎn)品及特點：

本產(chǎn)品可以用于大多數(shù)革氏陽性和陰性細菌基因組DNA的快速提取。

1. DNA純凈，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。

2. DNA產(chǎn)量一般在5-20μg/mL飽和菌液（10⁸-10⁹個細胞）。

3. 操作簡單，整個過程約15分鐘，容易放量操作。

4. 每次提取可以處理0.1-1.5 mL的細菌，也可以使用菌落。

5. 價廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當，但價格。

6. 安全，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存（溶菌酶需要-20℃保存）有效期一年。

自備試劑：

超純水、氯fang和TE緩沖液。

使用方法：

注意：溶液A和溶液B容易產(chǎn)生沉淀，溶液B比較粘稠，用前均需要放置在65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。

一: 對革氏陰性細菌樣品

1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中， 12000-15000 g室溫離心1分鐘沉淀細菌，棄上清。

2. 加入600 μL預(yù)熱的溶液A到細菌沉淀中，充分吹打均勻。

3. 再加入150 μL 預(yù)熱的溶液B到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。由于溶液B比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150 μL 約等于150-160 mg。也可以將1 mL 槍頭剪去一截再吸取。也可以同時加入15 μL的RNase A溶液。

4. 65℃放置3-5分鐘。如果室溫放置，DNA產(chǎn)量會降低10-20%。

5. 加入200 μL自備氯fang，震蕩混勻10-30秒，此時溶液將呈乳白色。

6. 12000-15000 g室溫離心2分鐘。此時上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個新的1.5 mL塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。

7. 加入1倍體積(約750 μL)的異丙醇到上清液中，用手上下顛倒30秒混勻。此時一般將有絮狀DNA沉淀出現(xiàn)。

8. 12000-15000 g室溫離心3分鐘。此時管底將有微小DNA沉淀，小心棄上清，注意不要丟棄DNA沉淀。

9. 在離心管中加1 mL 75%乙醇，短暫震蕩，12000-15000 g室溫離心3分鐘，棄上清。

10. 重復(fù)上述操作一次。

11. 短暫離心，小心吸棄殘留的液體（約50 μL）。此步不要省略，否則殘留的液體（含乙醇）將會影響DNA電泳、酶切很PCR等反應(yīng)。

12. 立即加入50-100 μL TE緩沖液充分溶解DNA沉淀。注意：由于基因組DNA較長并在沉淀時形成緊密復(fù)合物，充分溶解的時間遠長于質(zhì)粒DNA或PCR片段，有時需要長達數(shù)小時。如果在第3步?jīng)]有加RNase A溶液，或雖然加了但還擔心有殘留的RNA污染，可以在此時補加5-10 μL 的RNase A溶液，保溫30分鐘。

13. 直接取5-10 μL電泳檢測DNA，其余放冰箱備用。

二: 對革氏陽性細菌樣品

1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的革氏陽性細菌12000-15000 g室溫離心1分鐘后, 重懸于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL超純水+600 mg溶菌酶，配制后zui好分裝成小管并放-20℃長期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻5-10次后放37℃保溫至少30分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時間，需要自己根據(jù)不同的細菌摸索)。

2. 12000-15000 g室溫離心10分鐘，小心棄上清。

3. 后續(xù)處理接上面的革氏陰性細菌提取步驟中的第2步。

三: 其他注意事項

1. 可以直接使用細菌菌落提取DNA，操作時直接將細菌菌落挑入到溶液A中，后續(xù)操作同上。

2. 從單個菌落中提取到的DNA較少，所以只用10-30μL TE溶解。