一管式DNA膠回收試劑說明書

產品編號：BTN60706

規格：30T/100T

產品及特點：

本產品可以直接從溶化的瓊脂糖凝膠中沉淀回收單雙鏈DNA 的產品，也堪稱zui快速的膠回收試劑,操作時間只有玻璃奶式和柱式膠回收方法的1/3 左右。本產品也可以用于單雙鏈RNA膠回收。

1. 超快，整個過程不到15分鐘(對一個樣品而言)，由溶膠（3分鐘），放置（2分鐘），沉淀（5分鐘）和兩次洗滌（各1-2分鐘）幾步組成。

2. 純度高，回收產物可以直接用于連接、酶切、PCR、測序等各種反應，不影響后續酶反應。

3. 回收率高，一般大于50%。

4. 適用范圍廣，可用于回收普通瓊脂糖凝膠能夠分離的DNA 片段（一般在100 bp-50 Kb 之間），而柱式同類產品幾乎都不能回收50 Kb 的片段。

5. 一管式操作，不需要任何樣品轉移步驟，使大片段DNA 保持完整，同時減少了污染的可能。

6. 既可用于回收單雙鏈DNA，又可用于回收單雙鏈RNA。

7. 擴容性好，可以在一個離心管中（包括15 mL 或50 mL 離心管）進行大規模回收，沒有zui大吸附量的限制；而柱式膠回收試劑都受zui大吸附量的限制。

8. 本試劑盒足夠50次0.1g瓊脂糖凝膠的膠回收。

規格及成分：

保存條件：

常溫運輸, 4℃保存，有效期一年。

核酸沉淀液呈紅色，如果顏色發生變化，則表示pH 已經改變，請棄之不用。核酸沉淀洗滌液為無色液體，會在瓶底產生少量晶體狀產生沉淀，用前無需溶化，避開沉淀直接取上清液使用。

自備試劑：

TE 或超純水。

使用方法：

1. 從瓊脂凝膠上切下目的 DNA 片段，放入 1.5 mL 離心管中。盡可能多地去掉不含DNA 的膠。如果方便zui好稱重以便估計需要的溶膠液（空的1.5 mL 離心管EP 約0.9 克，一片普通膠片的重量在0.05-0.1 克左右）。

2. 按0.1 克膠加300 μL 通用溶膠液的比例加入通用溶膠液，65℃保溫3分鐘使膠融化。其間可用搖晃幾次以促進凝膠融化。如果放量使用，溶化膠的時間可能需要延長。

3. 待膠完全溶化后，按0.1 克膠加100 μL 核酸沉淀液的比例加入核酸沉淀液,充分混勻。如果回收20 Kb 以上的DNA 片段，混勻時需要溫和震蕩；對20 Kb 以下的DNA 片段，可以劇烈震蕩。

4. 室溫靜置至少2分鐘，此時管內將出現大量紅色顆粒狀沉淀。此步十分關鍵，不能省略而直接離心。

5. 13000 g 室溫離心5分鐘后, 小心吸棄上清，管底將有黃豆大小的紅色沉淀。

6. 加入0.8 mL 核酸沉淀洗滌液，充分震蕩混勻。注意：核酸沉淀洗滌液瓶底有晶體狀沉淀，用前無需溶解，但取用核酸沉淀洗滌液時需要避開沉淀。

7. 13000 g 室溫離心2分鐘，小心吸棄上清，管底將有芝麻大小的白色沉淀。

8. 再用0.2 mL核酸沉淀洗滌液重復第6-7 步一次，管底還有芝麻大小的白色沉淀。

9. 小心吸棄上清后即得純化的DNA 沉淀，加入少量TE 或水，充分吹打溶解。zui后還會有少量白色不溶沉淀，屬于正常現象。

疑難解答：

Q：電泳為何不能檢測到回收的DNA？

A：zui可能原因是各步加入溶液后沒有充分震蕩混勻，其次是沉淀在各步吸棄上清時候不小心吸走而丟失，三是通用溶膠液和核酸沉淀液的pH發生改變。

Q：電泳時為何有殘留熒光物在加樣孔中？

A：可能是瓊脂糖凝膠中的雜質吸附的DNA，吸取DNA 樣品時zui好短暫離心，只取上清液。這些不溶雜質一般不影響后續反應。使用高純度的瓊脂糖可以減少雜雜質的污染。我們一般使用OXOID 的瓊脂糖，得到的DNA 可以用于常見的分子生物學后續反應。