液相內毒素清除劑說明書

產品編號：BTN60607

規格：100T/500T

產品及特點：

去除液體生物樣品（包括質粒DNA 樣品）中污染的內毒素(endotoxin)具有重要的臨床意義，因為內毒素對原代細胞、傳代細胞和整體動物均具有顯著的毒性作用。由于內毒素(化學本質為脂多糖，即lipopolysaccharides)是包括E.coli在內的革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要組成成分，并且帶電性跟DNA 類似，所以從E.coli 細胞中提取的質粒DNA 和重組蛋白質藥物中常常含有大量的內毒素污染，并且很難用用常規方法（包括硅膠膜吸附，離子交換吸附、凝膠排阻過濾、氯化銫超速離心）去除。本產品就是專門用于去除生物樣品中的內毒素污染。

1. 簡單快速，一次處理只需要20 分鐘左右，不需要復雜儀器設備。

2. ，一次處理可以去除90%以上的內毒素，經過三次重復抽提可將內毒素的水平降低到0.2 EU(endotoxin unit，約0.1 ng LPS)/mL以下。

3. 適用范圍廣，可用于DNA、RNA、蛋白質或其他生物樣品。

4. 不影響DNA 和大部分蛋白質的活性，處理過的質粒DNA 可用于轉染實驗。

5. 既可小規模使用(在1.5 mL 離心管內)，也可放量使用。

規格及成分：

保存條件：

常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑：

無內毒素的水或TE 緩沖、3M 醋酸鈉、乙醇。

使用方法：

如果使用前本產品有分層，冰浴后振蕩混勻。

一：用于體積小于500 μL 的DNA/RNA樣品

1. 在一干凈的離心管中加入500 μL 的樣品。如果不足500 μL,可以用水或TE補足。

2. 加入50 μL 的3 M 醋酸鈉（pH 5.2），混勻后冰浴5 分鐘。

3. 加入50 μL 預冷的本產品，充分混勻后冰浴10 分鐘。

4. 65℃水浴直到溶液變濁或出現分層為止（一般需要1-5 分鐘）

5. 室溫12000-15000×g 離心2 分鐘(不能低溫離心)，離心后上層為無色透明，下層為淡藍色。

6. 將上清轉移到新的離心管中。

7. 如果需要，可以重復步驟3～6。

8. 加1 倍體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇，混勻, 12000-15000×g 離心30分鐘。

9. 棄上清后用70%酒精洗2 次。

10. 空氣干燥沉淀后加入100 μL 無內毒素的水或TE 緩沖液溶解沉淀。

11. 測定DNA 和內毒素的含量，與未純化的樣品比較。

二：用于體積大于500 μL的DNA/RNA樣品

整個操作同上，只是在15 或50 mL 塑料離心管中進行，離心速度不能超過離心管的承受力。

三：整合到堿變性法質粒DNA 制備過程中

整個操作同上，只是：

1. 樣品必須是加溶液III 離心后得到的上清液或zui后得到的質粒溶液。

2. 如果處理的是加溶液III 離心后得到的上清液，可以略去第2 步操作。

3. 處理后的溶液需要用試劑盒提供的或自備的上柱液調整鹽離子濃度，然后上柱，以后的操作按試劑盒提供的操作手冊進行。

4. 洗脫DNA 所用水或溶液必須無內毒素污染。

四：對蛋白質和其它生物樣品

整個操作同上，只是：

1． 略去第2 步操作，加3 M 醋酸鈉（pH 5.2）只為沉淀核酸。

2． 第4 步改為37℃保溫以免蛋白質變性，溶液呈混濁狀或分相一般需要20-30分鐘。

3． 略去第8 步和以后操作。

疑難解答：

Q:為何用常規的方法很難去除生物樣品中的內毒素?

A:因為內毒素帶電性跟DNA 和部分蛋白質相同，所以基于帶電性的分離方法(如硅膠膜吸附，離子交換吸附)不能將它們分開;同時內毒素又是雙性分子（類似于細胞膜的磷脂分子），能夠形成大小不等的聚合物，跟質粒DNA 和蛋白質大小接近，所以基于分子量大小的分離方法(如凝膠排阻過濾和氯化銫超速離心)也不能將其有效分離。