超快核酸電泳液干粉說明書

產品編號：BTN51210

規格：20L/50L

產品及特點：

SuperBuffer-2 是百奧萊博在SuperBuffer 基礎上開發的DNA/RNA 兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer 一樣，能以高達30 V/cm 的電壓電泳，達到快速電泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本產品對鹽離子濃度敏感度低，同時還能用于RNA 電泳。其主要優點是:

1. 快速，電泳時間短, 對分辨率要求不高的電泳（如PCR 和酶切檢測等）甚至可以在5-10 分鐘內完成。

2. 不影響后續的Southern 雜交，DNA 膠回收和DNA 連接等反應。

3. 價格與TBE(干粉)相當甚至更。

4. DNA 膠回收率高于使用TAE 和TBE 電泳的膠回收。

規格及成分：

保存條件：

常溫保存和運輸，有效期兩年。

自備試劑：

蒸餾水。

使用方法：

一：溶液的配制

將本產品全部加到一個干凈的容量適當的容器中，按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌，直到干粉完全溶解(一般需要30 分鐘左右)。

注：其他濃度的濃縮液配制可以按比例計算，但濃縮液濃度不能超過20×，否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未徹底混合均勻的成份，所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時間不用，zui好滅菌后放4℃長期保存。

二: DNA 電泳

將SuperBuffer-2 濃縮液用蒸餾水稀釋到1×，除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結果外，操作跟使用TAE 和TBE 基本一樣。需注意的地方是：

1. 電壓：在SuperBuffer-2 溶液中既可以使用常規電壓，也可以使用較高電壓，只是使用常規電壓時，其快速的優越性就體現不出來。使用較高電壓時，由于各電泳槽結構不同，zui佳電壓需要稍做摸索。一次zui好將工作電壓調到zui高電壓的80%左右，即平均25 V/cm（電距離）。對一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10 分鐘；對大的電泳槽，可用400-450V 跑5-10 分鐘。每次根據電泳結果和緩沖液溫度決定各電泳槽的zui佳工作電壓和時間。一般電壓越高，電泳時間越短。若在電泳時發生電流或電壓逐漸下降的現象，請檢查電泳儀是否設置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數超過3 次或緩沖液中有細菌/真菌生長也會出現此現象，需要更換新的緩沖液。

2. 膠濃度：建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右，對于長度在100 bp 以下的DNA 片段，可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會丟失水份，所以zui好在溶膠后適當補充水份（可以前后稱重），否則膠濃度會逐漸增加，DNA 的移動速度會減低、產熱會增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節約膠的用量，另一方面可以使DNA的泳動速度更快，同時還能夠提高DNA 的回收率。

3. 染色：如果使用EB，zui好把染料加入到融化后的凝膠中（只是EB 的終濃度zui好為0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE 和TBE 時稍高），但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用百奧萊博低毒染料綠如藍，zui好將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料，則長時間電泳后（超過20 分鐘），大部分染料在高壓下會與DNA 分離，DNA 條帶可能會看不見或看起來很淡，此時應該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl（終濃度≥0.05 mol/L）能提高染色效果。SuperBuffer-2 與SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以結合使用。

4. DNA 條帶扭曲：DNA 樣品中所含SDS 量過高時（SDS 主要來于上樣液）， DNA條帶將出現扭曲，影響實驗效果。建議使用不含SDS 的上樣液。

5. 反復使用：1×SuperBuffer-2 電泳液至少可以重復使用2-3 次，如果使用大電泳槽，可以重復使用的次數會更多。

6. TAE 和TBE 膠：已經用TAE 和TBE 電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1× SuperBuffer-2 電泳液中按上述電泳條件電泳，但有時候會有扭曲現象。

三：RNA 電泳

跟DNA 電泳一樣，必須在使用前用水將SuperBuffer-2 溶液稀釋到1×，其使用方法跟DNA 電泳的主要區別是：

1. 電壓：RNA 電泳時，zui高使用電壓大約只有DNA zui高使用電壓的一半左右，所以一般minigel 可以使用150 V 左右的電壓。由于各實驗室電泳槽規格各異，一次電泳時，zui好將工作電壓調到跟MOPS 電泳一樣的電壓，每次再逐漸往上調電壓和時間，根據電泳結果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。

2. RNA 上樣液：RNA 必須與含變性劑的RNA 上樣液混合，并在80℃保溫10 分鐘后冰浴2-5 分鐘再上樣。不能直接將RNA 樣品上樣或使用DNA 上樣液，否則電泳不但很難得到清晰的條帶，并且在加樣孔中還會有看似DNA 污染的條帶出現。推薦使用百奧萊博生產的RNA 變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAON。

3. 膠濃度：RNA 電泳zui好使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠，用1X SuperBuffer-2配制。

4. 染色：同DNA 電泳。