Pfu DNA聚合酶說明書
產品編號：BTN51207
規格：100U
產品及特點：
Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis （激烈火球菌）DNA Polymerase基因在大腸桿菌中表達并經多次過柱純化分離而得?？捎糜诟弑Ｕ鍼CR、長鏈PCR的擴增，還可以用于DNA片段的粘轉平反應。
1.它具有3’-5’聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一樣，能夠用于PCR反應。
2.與Taq DNA Polymerase不同的是，它還具有3’-5’外切酶活性，能糾正DNA擴增過程中產生的堿基錯配。
3.其出錯率zui低的是具有校正功能的耐高溫DNA Polymerase中zui低的。
4.Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA 聚合酶熱穩定性更好，95℃ 1小時仍維持90％以上活性。
規格及成分：
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成分 |
規格 |
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Pfu DNA聚合酶 (3U/μL) |
100U |
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10×Pfu Buffer |
0.1ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
低溫運輸，-20℃保存。
使用方法：
以λDNA為模板進行PCR擴增反應為例
1.按下列組份配制PCR反應液。
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Pfu DNA聚合酶(3U/ μL) |
0.5-1 μL |
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10×Pfu Buffer |
5 μL |
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dNTP Mixture（各2.5 mM） |
4 μL |
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模板DNA |
見下 |
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引物1（10 uM） |
1 μL |
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引物2（10 uM） |
1 μL |
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滅菌蒸餾水 |
Up to 50 μL |
推薦50 μL PCR反應體系中模板DNA推薦使用量
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哺乳動物基因組DNA |
0.5-1μg |
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酵母基因組DNA |
5-500 ng |
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細菌基因組DNA |
0.5-50 ng |
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質粒DNA |
5-500 pg |
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PCR回收片段 |
1-100 pg |
2.PCR反應條件
以λDNA為模板，擴增1 kbp的DNA片段的PCR反應條件如下：
94℃ 3 min
94℃ 30 sec.
55℃ 30 sec. 30-35cycles
72℃ 2 min.
72℃ 5 min
注：PCR反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異。在實際操作中需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況，設定zui佳的反應條件（溫度、時間等）。
注意事項:
PCR的反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）可增強PCR擴增的特異性，減少PCR過程中的非特異性反應，能得到良好的PCR結果。
相關資料:
10×Pfu Buffer的組成
10×Pfu Buffer
Tris–HCl (pH8.8) 200 mM
KCl 100 mM
(NH4)2SO4 100 mM
MgSO4 500 mM
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位。
質控標準
1、SDS-PAGE 考馬市亮藍染色無雜帶污染。
2、無核酸內切酶活性檢測（切刻酶活力）、核酸外切酶活性、核酸酶活性檢測。
