G載體說明書
產品編號：BTN4610
規格：2μg
產品及特點：
本產品是零背景通用（General）克隆載體,其無背景克隆原理是該載體攜帶一自殺基因,多克隆位點在該基因之中,自身環化的載體其自殺基因正常表達,轉化細胞不能生長。只有當外源DNA 插入片段打斷該自殺基因的正常編碼順序,轉化細胞才能生長,所以zui后得到的轉化子幾乎都是含有插入片段的重組子。
1. 零背景,陽性率一般為95%,不用藍/白篩選,尤其適合于構建文庫用。
2. 適用于大部分常用的E.Coli 菌株,而市場上的同類產品一般都需要特殊的菌株作宿主。
3. 克隆步驟簡化,可一小時內即可完成。載體無需完全酶切，無需去磷酸化,無需要純化片段。
4. 多拷貝復制起始位點(ori),便于大量制備質粒。
5. 質粒用量僅為常規方法的1/5。
格及成分：
|
成分 |
規格 |
|
克必隆G 載體DNA |
5μg |
|
選擇液,1000× |
1.5ml |
|
說明書 |
1份 |
保存條件：
4℃運輸，-20℃保存。
自備試劑：
宿主細菌，LB 培養基。
使用方法：
G 載體的轉化和保種
常態轉化（需要使用百奧萊博的克必隆常態轉化液）
1. 標記無菌的1.5 mL 塑料離心管并加入1 mL 液體培養基（如SOC 或LB）。
2. 用接種環,無菌牙簽或吸頭從培養皿上挑取1-3 個劃盤過夜生長的DH5α，DH10B 或HB101 等常見的E. coli 菌落到無菌離心管中，菌落直徑在3-5 mm 之間（如果直徑太小，可以適當多挑幾個）。用移液槍輕柔吹打散開。如果使用甘油菌種保存液,則直接取50 μL 菌種液到1 mL 培養液中。
3. 37℃保溫1小時。
4. 室溫10000 g 離心1分鐘后小心移棄上清(培養基), 離心速度低于10000 g 則細菌沉淀易丟失。沉淀的細菌約芝麻或麥片大小為宜。
5. 短暫離心, 用移液槍小心將殘留的培養液(約50 μL)吸出，否則殘留培養基將會嚴重影響轉化效率，故此步一定不能省略。
6. 加入50 μL 冰浴的克必隆轉化液并小心將細胞輕柔吹打均勻。
7. 在樣品管中加入1-10 μL 克必隆G 載體DNA 并輕柔吹打均勻。
8. 將上述離心管置于-20℃直到液體凝固為止（一般需要20分鐘），然后置于冰浴5-10分鐘。
9. 在離心管中加入1 mL 無抗菌素的SOC 或LB 培養液，混勻后置37℃水浴保溫1小時。
10. 將溶液充分吹打混勻后分別取100 μL 涂于含50 μg/mL Amp 的培養盤上和含50 μg/mL Amp+選擇液(1×)的培養盤上，剩余轉化zui好留4℃以備再用。
質粒信息：
質粒圖譜
克隆位點
