植物DNA提取試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN3672

規(guī)格：100T/250T

產(chǎn)品及特點：

植物DNA提取試劑盒是根據(jù)經(jīng)典的方法改良得到的專門用于提取新鮮或冷凍植物組織基因組DNA(包括葉綠體DNA和線粒體DNA)的試劑盒。

1. 操作快速， 整個過程在30 分鐘內(nèi)即可完成。

2. 純度高，A260/A280 在1.9左右， 可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。提取得到的DNA 大小在30-50Kb 之間。

3. 產(chǎn)率高，高于大多數(shù)同類產(chǎn)品(尤其是基于離心柱的提取產(chǎn)品)。

4. 安全，本試劑盒對人體，無腐蝕性和刺激性氣味。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸及保存，RNase A 溶液4℃保存，有效期一年。

自備試劑：

氯fang、異丙醇、75%乙醇、TE。

使用方法：

注意：溶液A 和溶液B 容易產(chǎn)生沉淀，溶液B 比較粘稠，用前均需要放置在65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。

1. 65℃預(yù)熱溶液A，待其沉淀溶化后，充分混勻，取0.75 mL 加入到10-15mL 塑料離心管（常用于培養(yǎng)細(xì)菌用）中并放置于65℃待用。

2. 稱取植物組織0.1-0.3g 左右，剪成微小的碎片，轉(zhuǎn)移到裝有溶液A 的離心管中短暫勻漿。勻漿過程中將產(chǎn)生大量泡沫，屬于正常現(xiàn)象。也可以液氮研磨后將粉末加入到預(yù)熱的溶液A中(建議不要在陶器或玻璃研缽中破碎細(xì)胞，因為其中的主要成分二氧化硅會非特異地吸附DNA，降低DNA 回收量。但可以在塑料研缽中研磨)。

3. 將勻漿液(包括植物碎片)全部轉(zhuǎn)移到新的1.5mL 塑料離心管中。注意：勻漿液較為粘稠，可將1 mL 槍頭剪去一截后用于轉(zhuǎn)移勻漿液，不能吸取的植物碎片可倒入。

4. 在勻漿液中加入0.5 倍體積 65℃預(yù)熱的溶液B，顛倒數(shù)次混勻。由于溶液B 比較粘稠，可以將1 mL 槍頭剪去一截再吸取。

5. 加入15 μL 的RNase A 溶液（10 mg/mL）。

6. 65℃放置3-5 分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量會降低10-20%。

7. 加入200 μL 自備氯fang，震蕩器上充分震蕩混勻30 秒。

8. 12000-15000 g 室溫離心2 分鐘，此時兩相交界面將有白色膜狀物，小心轉(zhuǎn)移上清液到一個新的1.5 mL 塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。

9. 加入1 倍體積(約750 μL)的自備的異丙醇到上清液中，蓋緊蓋子后用手上下顛倒30 秒混勻。此時一般將有絮狀DNA 沉淀出現(xiàn)。

10. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘。此時管底將有微小DNA 沉淀，小心棄上清，注意不要丟棄DNA 沉淀。

11. 在離心管中加1 mL 75%乙醇，短暫震蕩，12000-15000 g 室溫離心3分鐘，棄上清。

12. 重復(fù)上述操作一次。

13. 短暫離心，小心吸棄殘留的液體（此步不要省略，否則殘留的液體含乙醇將會影響DNA 電泳、酶切和PCR 等反應(yīng)），室溫晾干。

14. 加入50-100 μL 自備的TE 緩沖液充分溶解DNA 沉淀。直接取5-10 μL電泳檢測DNA，其余放冰箱備用。