血液DNA提取試劑盒說明書

產品編號：BTN3671

規格：150T

產品及特點：

本產品是基于經典離心法的、專門用于從新鮮或冷凍的動物(包括人和禽類)抗凝全血中提取基因組DNA的試劑。具有下列特點：

1. DNA純凈，OD260/OD280在1.8-2.0之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。DNA產量一般在30-50μg/mL全血。

2. 操作簡單，整個過程約15分鐘，室溫操作，適合大規模樣品處理。

3. 一次的血液處理量zui多可達5mL，不需要柱子，不會發生其他同類產品經常發生的堵塞現象。

4. 價廉物美，與國外同類產品相比質量相當，但價格只有其一半左右。

5. 安全，本試劑盒對人體，無腐蝕性和刺激性氣味。

規格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑：

氯fang、異丙醇、75%乙醇。

使用方法：

1. 在裝有抗凝血液的離心管中，按1：1的比例加入A型紅細胞裂解液并輕柔顛倒混勻。

2. 5000-10000g室溫離心2分鐘，小心吸棄棄上清。

3. 將沉淀重懸于1/2體積(按zui初血液的體積計算)的紅細胞裂解液A型中，輕柔吹打混勻后5000-10000g室溫離心2分鐘。

4. 小心棄去上清，沉淀即為去除了紅細胞和白細胞胞漿的白細胞細胞核。

5. 在白細胞細胞核中加入 0.6mL溶液A(溶液A用前需要充分搖勻)，用移液槍輕柔吹打混勻(劇烈吹打會打斷DNA)。

6. 68℃水浴10分鐘(此步可省略，但產量略有降低)。

7. 加入0.2mL氯fang和0.3mL溶液B，立即小心顛倒混勻。

8. 室溫13000-15000g離心3分鐘，小心將上清(約0.7mL)轉移至一新的1.5mL塑料離心管中。

9. 加入等體積異丙醇(自備)，輕柔顛倒混勻5-8次，此時一般會出現絮狀DNA沉淀。DNA可以用下列方法之一回收。

10. 方法一：可以用槍頭將絮狀DNA挑出，放在1mL 75%乙醇中幾十秒使其中的鹽離子進入乙醇中，然后再挑出DNA，在空氣中放半分鐘使乙醇揮發，再轉移到0.1-0.3mL自備的TE緩沖液中溶解過夜(大分子的DNA需要長時間才能徹底溶解)。

11. 方法二：室溫13000-15000g離心1分鐘，去盡上清。在DNA沉淀中加入75%乙醇，震蕩后室溫13000-15000g離心1分鐘，去盡上清(含鹽離子)。重復75%乙醇洗滌一次。短暫離心，去盡殘留75%乙醇(此步十分重要，不要省略，否則乙醇會影響DNA的溶解和后續的使用)，zui后在DNA沉淀中加入0.1-0.3mL自備的TE緩沖液過夜溶解DNA待用。

疑難解答：

Q:本產品是否可以用于放量操作?

A:可以在大的離心管中進行放量操作，如每次處理5-100mL血液，只是客戶需要單獨購買紅細胞裂解液，并按比例增加溶液A和溶液B的用量。

Q:冷凍血液為何DNA產量很低?

A:冷凍過程中形成的冰晶刺破了細胞膜和白細胞細胞核膜，紅細胞裂解液處理時釋放的DNA將進入上清并丟失，所以zui后得到的DNA只是少數沒有是被冰晶刺破的細胞的DNA。對冷凍血液，建議使用本公司的陳血DNA提取試劑盒或者在冷凍前直接將血液保存在血液DNA保存液中常溫保存。

Q:本產品血液DNA提取得到的DNA含不含線粒體 ?

A:本產品用到的A型紅細胞裂解液(單獨的產品)裂解血液后得到是白細胞細胞核，所以不含。