SYBR GreenⅠ,電泳級說明書

產品編號：BTN3280

規格：50μl

產品及特點：

SYBR Green I, EG 是電泳級低毒高靈敏的花青類DNA 熒光染料，適用于各種核酸電泳分析。

1. 低毒安全，其致突變性低于EB 數倍甚至數十倍。

2. 髙靈敏，SYBR Green I 與dsDNA 結合，熒光信號會增強800-1000倍，至少可檢出 20 pg DNA，靈敏度高于EB 染色法10－25 倍。

3. 適用范圍廣，可適用于多種電泳分析，包括瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳和毛細管電泳等。與百奧的萊博SuperBuffer-2 兼容。

4. 不影響其它修飾酶（Taq 酶、逆轉錄酶、內切酶、T4 連接酶等）作用。

5. 操作簡單，無須脫色或沖洗。

規格及成分：

保存條件：

常低溫運輸，-20℃閉光保存， 有效期一年。

自備試劑：

電泳緩沖液（稀釋用）。

使用方法：

使用方法之一：電泳前染色

本方法是在上樣時對DNA 進行染色，只適于瓊脂糖凝膠電泳。

1. 用高純度的無水DMSO 將10000×的SYBR Green I 稀釋100 倍成100×電泳前染色液。染色液可以在-20℃和閉光條件下可以保存一個月以上。

2. 按常規方法制備膠，膠的厚度zui好不要超過5mm，膠中不能含任何染料。

3. 將100 X 電泳前染色液與DNA 樣品（包括DNA Marker）按1：10的比例混合，室溫放置10-15 分鐘，加上樣液后上樣。

4. 上樣后電泳。

5. 在300 nm 的UV 下觀察。UV 的功率zui好為90W（15W X 6），手持UV 一般功率不夠，難以得到滿意的靈敏度。除300 nm 外，SYBR Green I 還可以在500 nm 和380 nm 的激發光下觀察（如使用Dark Reader 藍色可見光透色儀）。也可以用激光掃描儀記錄電泳結果。

6. 用配置了520-550 nm 濾光片（一般呈黃色或深黃色）的相機拍照。

注意：不要使用與EB 兼容的紅色濾光片（能阻擋520-550 nm 的光）。

如果能再加上能濾去UV 的濾光片，效果會更好。

7. 后續Southern 或Northern 轉膜或膠回收按常規操作進行。

使用方法之二：電泳中染色

本方法是將SYBR Green I 加入到瓊脂糖凝膠中，優點是不需要額外的染色處理，只適于瓊脂糖凝膠電泳。

1. 將10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但溫度已經降低到50℃左右的瓊脂糖凝膠中，使其終濃度在0.5-1X 左右，混合均勻后倒膠，厚度zui好不要超過5 mm。

2. 按常規方法上樣和電泳。

3. 電泳后觀察和照相處理同方法一。

注意：由于在瓊脂糖凝膠中的SYBR Green I 在加熱融化時會大量分解，所以瓊脂糖凝膠zui好需要多少配多少。

使用方法之三：電泳后染色

本方法是在電泳后對DNA 進行染色，適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE，檢測靈敏度可達20 pg DNA，但該方法需要單獨的染色處理。

1. 按照常規方法進行電泳。

2. 用pH 7.0-8.3 的緩沖液（如：TAE，TBE 或TE）將10000×SYBR Green I 稀釋10000 倍成1×電泳后染色液。

3. 將電泳后染色液倒入合適的聚丙烯容器中，放入瓊脂糖凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30 分鐘。對聚丙烯酰胺凝膠，可取下一塊玻璃板，然后將配好的電泳后染色液輕輕地倒在PAGE 膠板上，讓染色液均勻地覆蓋整個PAGE 膠板，靜置染色30 分鐘。避免讓染色液與玻璃表面接觸。

4. 觀察和照相處理同方法一。

注意：電泳后染色液可以冷凍避光儲存一個星期。反復使用次數取決于膠的大小（膠越大，非特異吸附產生的損耗就越大），一般可重復使用4次。

注意事項：

1. 融化：本產品溶于DMSO 中, 融化時一定要讓其徹底融化，否則SYBRGreen I 在液相和固相中濃度不均，影響實驗的可重復性。

2. 容器：SYBR Green I 對聚丙烯材料的親和力非特意吸附zui小，故建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中使用專用的聚丙烯類容器，容器表面會被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙烯容器。

3. 反復使用：由于凝膠和容器的非特意吸附，使用過的SYBR Green I 再染色時效率會逐漸降低。

4. 穩定性：稀釋后的SYBR Green I 工作液體zui適保存條件是閉光、密封、低溫（4℃）、pH 在7.5-8.3。避免將本產品直接加入熱的瓊脂糖凝膠中，禁止用微波加熱處理SYBR Green I。

5. 稀釋液：可以用電泳緩沖液稀釋SYBR Green I，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2 等。zui好不要使用水和pH 7.8（25℃）的Tris 緩沖液。后者的pH 在4℃時會升高到8.4。

6. 其他影響因素：染色液中zui好不要有SDS，也不要用去污劑洗滌染色用的聚丙烯容器時，0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I 與DNA 結合。用deaza-G 替代G 的DNA 不能有效染色。

疑難解答：

Q：DNA 條帶為何出現彎曲或模糊？

A：DNA 過量，將DNA 用量降低到1-5 ng/條帶。電泳時間不要超過2 小時，否則SYBR Green I 會從DNA 上分離出來，會產生彌散狀條帶。電壓不能太高，否則產熱會影響SYBR Green I 與DNA 的結合。

Q：醇/鹽沉淀法能否把結合在DNA 上的SYBR Green I 去掉？

A：可以。其中乙醇效果zui好，異丙醇次之。但正丁醇、氯fang和苯酚抽提不能去除與DNA 結合的SYBR Green I。

Q：用SYBR Green I 染過的膠能否用于Southern 或Northern Blot？

A：可以，但zui好在預雜交和雜交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I 與DNA 分開。

Q：能否用SYBR Green I 染色膜上的DNA。

A：可以用來染色帶正電的尼龍膜上的DNA，不能用于中性尼龍膜和硝酸纖維素膜。