RNA電泳液,10×說(shuō)明書
產(chǎn)品編號(hào)：BTN3150
規(guī)格：100mL/250mL
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
本產(chǎn)品是預(yù)配的10×RNA 專用電泳液（即10×MOPS 電泳液），專門用于RNA 電泳分析。
1. 即開即用，用戶不需要自己進(jìn)行RNase 滅活、高壓滅菌、pH 調(diào)節(jié)等操作。
2. 與Northern雜交等后續(xù)反應(yīng)兼容。
規(guī)格及成分：
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成分 |
100ml |
250ml |
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RNARUN |
100ml |
250ml |
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說(shuō)明書 |
1份 |
1份 |
保存條件：
常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。
自備試劑：
瓊脂糖、37%甲醛、EB (10 mg/mL)、去離子甲酰胺。
使用方法：
一、用本產(chǎn)品配制瓊脂糖甲醛變性膠（1.2%, 100 mL）
1. 在三角瓶中加入下列成份:
瓊脂糖 1.2 g
DEPC水 87 mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后，加入10 mL 本產(chǎn)品。
3. 待膠冷卻至60°C 左右，再加下列成份:
37%甲醛 3.0mL
EB (10 mg/mL) 2-4L
4. 混勻后倒膠, 凝固半小時(shí)后即可以使用瓊脂糖甲醛變性膠(需要量RNA 變性上樣液和RNA 電泳液)。
二、用本產(chǎn)品配制RNA 變性上樣液（以一個(gè)RNA 樣品為例）
本產(chǎn)品 2.0L
37%甲醛 3.5L
去離子甲酰胺 10.0L
RNA 樣品 4.5μl
于85℃變性10 min，冰浴冷卻5 分鐘后加RNA 變性上樣液后直接上樣。
三、用本產(chǎn)品配制RNA 電泳液
將本產(chǎn)品用無(wú)RNase 的水稀釋十倍后即可直接用于RNA的瓊脂糖甲醛變性膠使用。
四、電泳條件
電泳時(shí)，將凝膠預(yù)電泳5 min（電壓為5 V/cm）。隨后加樣品和分子量對(duì)照(如果有的話)，以3－4 V/cm 的電壓電泳，直至溴酚藍(lán)遷移至膠下游的3/4 處。電泳結(jié)束后，在紫外燈下拍照。
注意事項(xiàng)：
每一泳道至多可分析30g RNA，通常用10-20g 總RNA 進(jìn)行Northern雜交，可以檢測(cè)高豐度mRNA（占mRNA總量的0.1%以上）；如待測(cè)RNA 含量微，每個(gè)泳道需加0.5-3.0g poly(A)+ RNA。
溴酚藍(lán)泳動(dòng)速度相當(dāng)于300bp DNA，二甲苯青FF 泳動(dòng)速度相當(dāng)于4Kp DNA。
疑難解答：
Q：RNA 電泳為何zui好使用RNARUN，不要使用DNA 電泳液TAE 或TBE？
A：一是因?yàn)镽NARUN 經(jīng)過(guò)去RNase 處理，而一般實(shí)驗(yàn)室使用的TAE 或TBE都沒(méi)有經(jīng)過(guò)去RNase 處理，故有可能含RNase，使樣品RNA 降解。即使要滅活TAE 或TBE 中的RNase 也十分麻煩，因?yàn)镈EPC 不能處理含Tirs的緩沖液；二是TEB 含有硼酸，硼酸是研究多羥基醇和糖的經(jīng)典試劑，它能與RNA 中含多羥基的核糖反應(yīng)生成糖硼酸絡(luò)合物，故電泳時(shí)RNA 帶型十分彌散。在一定濃度范圍內(nèi)，RNA 分子間還能通過(guò)硼酸形成分子間復(fù)合物，出現(xiàn)電泳時(shí)各種RNA 以一條帶的形式出現(xiàn)的現(xiàn)象。所以RNA 電泳時(shí)要避免使用含硼酸的緩沖液。使用TAE 效果雖然比TBE 稍好，但文獻(xiàn)報(bào)道（BioTechniques2000, 28:414-415），它不能分離某些大小不同的RNA 分子。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA 嗎？
A：不是。用TAE 或TBE 電泳液和非變性膠電泳RNA 時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過(guò)堿基互補(bǔ)或通過(guò)硼酸絡(luò)合（如果使用TBE 作電泳液的話）形成的復(fù)合物，加RNase
處理后，這些紅色熒光物一般會(huì)消失。為避免此現(xiàn)象，建議zui好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA 變性。使用我司基因優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液RNAON 可以使RNA 在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)， 可以使用TAE 或超快電泳液SuperBuffer-2,zui好不要使用TBE 緩沖液，因?yàn)門BE 中的硼酸能與RNA 的多羥基形成復(fù)合物，RNA很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase 處理RNA 樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase 一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用手冊(cè)進(jìn)行操作。
