LifeGuard? ?Soil Preservation Solution
土壤 RNA 保護(hù)液
貨號(hào) 數(shù)量
12868-100 100ml
12868-1000 1L
簡(jiǎn)介
對(duì)于將要用來(lái)提取RNA或DNA的土壤樣品因?yàn)樵诓杉瓦\(yùn)輸過(guò)程中，RNA表達(dá)隨著環(huán)境的變化發(fā)生突然改變。而加入專業(yè)配方RNA保護(hù)液LifeGuard?Soil Preservation Solution，可在保護(hù)微生物存活的情況下使它們處于停滯狀態(tài)。
RNase和DNase活性被抑制后可確保無(wú)論在什么樣的野外條件下采集樣品，都能獲得準(zhǔn)確的全長(zhǎng)cDNA合成和 16srRNA序列分析結(jié)果。加入LifeGuard? 土樣中的微生物多樣性可在-20℃下維持 30 天，4℃ 2 星期，室溫 一星期。RNA完整性在室溫下可維持 30 天。
相關(guān)產(chǎn)品 貨號(hào) 數(shù)量
RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit 12866-25 25 preps
RNA PowerSoil® DNA Elution Accessory Kit 12867-25 25 preps
Vortex Adapter, holds 4 (15ml) tubes 13000-V1-15 1 unit
On-Spin Column DNasse I kit(used off-column) 15100-50 50 preps
設(shè)備要求：
15ml 離心機(jī)（2500g）
移液器
Vortex-Genie®2 渦旋儀（MO BIO 貨號(hào)#13111-V-220）
試劑盒組分：RNA 保護(hù)液
保存
室溫（15-30℃）保存。
操作步驟
1、每克土壤加入 2-2.5 倍體積 LifeGuard? 保護(hù)液。如，一克土壤加入 2-2.5ml 保護(hù)液。若采集的土壤直接放入到RNA PowerSoil® 15ml Bead Tubes，2g 土樣可加入 5ml 保護(hù)液。
注意：若對(duì)象是底泥沉積物樣品，每克濕重樣品請(qǐng)加 3 倍體積保護(hù)液。
2、渦旋或手工搖勻，使樣品與溶液混勻。LifeGuard? 保護(hù)液液面應(yīng)當(dāng)高于土樣層。
3、根據(jù)情況，-20℃、4℃或室溫保存。要提取 RNA 時(shí)，2500g 離心 5min.移除 Tube 管中的 LifeGuard? 保護(hù)液收集土樣。4、若土樣直接采集到 15ml Bead Tube 中，離心去掉 Lifeguard? 后接著 RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit 說(shuō)明書步驟 2 繼續(xù)。
疑點(diǎn)難點(diǎn)
LifeGuard? 已通過(guò)了大量不同微生物豐度和含水量的樣品的測(cè)試。沉積物含水量較高會(huì)稀釋保護(hù)液，需要使用更高的體積比（3:1）。土壤在不同溫度條件下保存的穩(wěn)定性和 LifeGuard? 維持微生物多樣性的能力，決定于樣品中的微生物豐度。微生物豐度未明或保存環(huán)境溫度超過(guò)常溫（22-25℃）的，建議盡快轉(zhuǎn)移到-20℃或 4℃，及每克樣品使用多于 2.5ml的 LifeGuard? 保護(hù)液，以確保維持住微生物群落多樣性不變。要更長(zhǎng)時(shí)間的保存或運(yùn)輸（＞30 天），請(qǐng)-20℃保
存樣品。
水樣濾膜：
我們也測(cè)試了 LifeGuard Soil Preservation Solution 對(duì)濾膜 DNA、RNA 的保護(hù)。對(duì)于渾濁樣品，能有效減少核酸降解。加入 2-4ml LifeGuard 到裝有已過(guò)濾水樣濾膜的研磨管中，浸潤(rùn)濾膜為度。4℃或更低溫度長(zhǎng)期保存（＞一周）。處理使用 LifeGurad 保存水樣濾膜前，先離心。盡可能吸掉保護(hù)液，避免其過(guò)分稀釋裂解緩沖液。另，為了使保護(hù)液盡可能去除，也可以把濾膜與研磨珠分開保存。
額外提示：
我們常被問(wèn)到采樣后土樣中 RNA 的穩(wěn)定性，以及 RNALater 的使用。事實(shí)上 RNALater 并不兼容土壤。我們做過(guò)用 RNALater 在不同溫度和時(shí)間下對(duì)土壤 RNA 的保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，RNALater 會(huì)令土樣釋放出更多的腐植酸，粘附在 RNA 上與 RNA 共同吸附于陰離子交換離心柱濾膜上難以去除。保存的時(shí)間越長(zhǎng)，樣品顏色變得越深。
