人白三烯B4(LTB4) ELISA試劑盒操縱步驟的留意要點
1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化）。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯，偶聯物吸附于固相載體上。
2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過*或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。
試驗操作中影響結果的原因及解決辦法
1. 選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣
可能原因： ① 血清或血漿標本分離不好即進行加樣; ② 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); ③ 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： ① 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 ② 加樣后及時放入孵箱。 ③ 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 ⑤ 標本較多時，請分批操作。
3. 孵育
可能原因： ① 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗徹底; ② 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法：① 貼封片或加蓋; ② 按說明步驟嚴格控制操作時間。
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