線粒體綠色熒光探針——Mito tracker Green

 

Cat number：KFS157

Store at -20℃ for 24 months，避光

For Research Use only

 

一、產品描述

 

具有細胞膜滲透性的 Mito-tracker Green（分子量 671.8）探針包含一個溫和的巰基反應性氯甲基基團，可用于標記線粒體，并在固定之后保留在線粒體內。標記線粒體，細胞可以與探針簡單孵育，探針通過被動擴散傳過質膜，并在有活性的線粒體內富集。一旦線粒體被標記，細胞再用醛基類固定劑固定之后，就可以進一步做下游實驗的深入處理。本探針染料可以解決一些致病性細胞上研究所面臨的困難，因為標記線粒體可以在細胞被固定之前開展。

 

雖然傳統的熒光染料，如四甲基羅丹明和羅丹明 123，很容易識別功能性線粒體，但是這些染料一旦在線粒體去化時也很容易被洗滌出線粒體。這些缺點限制了常規染色實驗中所用的醛類固定劑，以及一些實驗用的處理藥品的選擇。而本染料可以很好的解決這一問題。

 

注意本染料不適用于乙醛固定后的細胞和組織。

Mito Tracker Green probe：Ex/Em=490nm?516nm

 

二、產品包裝

組份	KFS157	儲存條件
線粒體綠色熒光探針 Mito tracker Green	50μg	-20℃，避光

注意：可用744μl無水DMSO溶解50μg染料探針，所得1mM儲液分裝避光可保存12 個月

 

三、操作說明

 

細胞制備與染色

 

的染色探針濃度取決于不同的應用程序類型，此處建議的初始條件是基于驗證的特定細胞類型，具體實驗中應摸索加以調整。

1.1 準備染色：1mM 儲液用之前，以 HBSS 或不含血清、酚紅的培養基稀釋至工作液濃度。（一般

來說，活細胞標記，探針工作濃度為 25~100nM，如果是固定的細胞，濃度一般為 100~200nM，為了減少可能的線粒體毒性超負荷，選擇盡可能低的染料濃度。）對于 96 孔培養板中的細胞樣品而言，每孔染色工作液體積 20μL 足夠標記。

1.2 染色貼壁細胞：以 1.1 步準備的預熱染色液，37 度孵育 30~120 分鐘。完成染色后，更換新鮮

預熱的培養基或緩沖液，用熒光顯微鏡或者熒光酶標儀觀察細胞。如是固定細胞，繼續染色后的固定和通透處理。

1.3 染色懸浮細胞：離心細胞，棄上清，用預熱的 1.1 步配制的染色液懸浮細胞，37 度孵育 

30~120 分鐘。完成染色后，更換新鮮預熱的培養基或緩沖液，用流式細胞儀或者熒光微孔板讀

數儀、或者熒光顯微鏡進行分析。如需固定細胞：用多聚-D-賴氨酸處理的載玻片，繼續染色后的

固定和通透處理。

 

 

 

可選步驟：染色后的固定和通透

 

2.1 洗滌細胞：染色完成后，用預熱的新鮮培養基或緩沖液洗滌細胞。

2.2 固定細胞：小心出去培養基或者緩沖液，用新鮮配制預熱的含 2~4%甲醛的培養基替代。

2.3 洗滌細胞：固定完成后，緩沖液洗滌多次。

2.4 通透處理（可選）：可選擇 Triton X-100 去污劑通透，如內皮細胞用含有 0.2%的 Triton X-100-

PBS 孵育 10 分鐘，或者在冰冷的丙酮中浸泡 5 分鐘，再以 PBS 洗滌。