活細胞熒光示蹤探針 CDCFDA, SE

Cat number：KFS156

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For Research Use only

一、產品描述

活細胞熒光示蹤探針 CDCFDA, SE [5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester]已被廣泛證實，用CDCFDA 活細胞綠色熒光探針標記細胞能有效確定總細胞的數量和一個樣本中存在多少活細胞。流式細胞術結合熒光染色法是分析非均質細胞種群的有力工具。

FDA 和它的衍生物無熒光分子進入細胞后被胞內無特異性的酯酶所水解產生熒光。這些熒光產物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中。因此，死細胞無完整細胞膜不能被染色。FDA 具備地膜轉運動力學和胞內水解作用或者類似物（CDCFDA）相關的細胞功能，因此可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測 FDA 標記的細胞。過 FDA 熒光標記的細胞在細胞系或者菌株中存在變化，可能是由于不同胞內酯酶的活性所造成的。活細胞熒光示蹤探針 CDCFDA, 琥珀酰亞胺酯是一個胺化 FDA 衍生物，可以用來制備各種 FDA偶聯物。

CDCFDA,SE（MW：626.35）是細胞示蹤以及檢測細胞活力的工作。

CDCFDA 光譜特性

二、產品包裝

三、操作說明

細胞制備與染色

的染色探針濃度取決于不同的應用程序類型，此處建議的初始條件是基于驗證的特定細胞類型，具體實驗中應摸索加以調整。測試建議至少十倍的濃度范圍內。一般情況下，長期染色（3 天以上）或者快速分裂的細胞使用需要 5~25μM 的染料。更短的實驗，如生存能力分析，可以采用 0.5~5μM。為了減少毒性負荷，選擇盡可能低的染料濃度。

1.1 用高品質 DMSO 溶解染料至終濃度為 10mM 儲液，儲液添加至無血清培養基中，保持終濃度

在 0.5~25μM 的工作濃度，孵育溫度為 37 度。

1.2 對于懸浮細胞，當細胞濃度達到所需要求，即可離心收集細胞，棄上清，用預熱的染色輕柔重

懸，在細胞的生長條件下孵育 15~45分鐘后，離心。對于貼壁細胞，當達到合適匯合度后，去掉培養基，更換以預熱的染色液，在細胞的生長條件下孵育 15~45 分鐘。

1.3 更換新鮮預熱的培養基，37 度另外孵育 30 分鐘，以保證胞內酯酶充分水解。

1.4 吸取 5μL 的染色菌液至載玻片上，加蓋 18mm 正方形蓋玻片，熒光顯微鏡觀察。

1.5 如需進行流式細胞術分析，可以收集細胞，調整細胞密度在 10⁶/mL，按懸浮細胞孵育標記方法之

后，上流式細胞儀進行分析。