細(xì)胞質(zhì)綠色熒光染料 CFDA, SE

Cat number：KFS154

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一、試劑盒說(shuō)明

CFDA SE 的全稱(chēng)為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47。CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFSE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒(méi)有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類(lèi)似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。

CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。

二、試劑盒組份

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、載玻片、蓋玻片(熒光顯微鏡觀察需用)

四、注意事項(xiàng)

1. CFDA SE配制成儲(chǔ)存液后宜在一個(gè)月內(nèi)使用完畢，長(zhǎng)不宜超過(guò)2個(gè)月。CFDA SE易被

水解，在水溶液中會(huì)很快變質(zhì)。請(qǐng)?jiān)谑褂眠^(guò)程中避免接觸水。在標(biāo)記細(xì)胞的過(guò)程中和水接

觸是在許可的范圍內(nèi)的。

2. CFDA SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋

內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

五、操作方法

1. 制備標(biāo)記儲(chǔ)液：可用儲(chǔ)液濃度為1~5mM。

2. 標(biāo)記和檢測(cè)：推薦短期標(biāo)記工作液濃度：0.1μM。推薦1~2天時(shí)長(zhǎng)的示蹤標(biāo)記，工作液濃  

度為：1~5μM。具體濃度針對(duì)不同細(xì)胞類(lèi)型建議適當(dāng)優(yōu)化。

注意：標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇 488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為 518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用 FL1 detection channel